發(fā)布時間：2018-02-14 06:15

  本文關(guān)鍵詞： 卒中 腦缺血再灌注 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 細胞凋亡 血腦屏障 神經(jīng)保護　出處：《遼寧醫(yī)學(xué)院》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的 近年來研究發(fā)現(xiàn)，促紅細胞生成素（erythropoietin，EPO）可以對腦缺血組織具有神經(jīng)保護作用，然而EPO很難通過血腦屏障，需要大劑量全身注射，由此產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用限制了缺血性卒中患者的臨床應(yīng)用。因此，本實驗建立了一種新的用藥策略，，探討EPO聯(lián)合tPA（tissue plasminogen activator，tPA）治療對大鼠腦缺血再灌注（ischemia-reperfusion，I/R）損傷的保護作用以及作用途徑和機制，為缺血性卒中防治提供新思路。 方法 選用成年雄性SD（Sprague Dawley）大鼠54只，隨機分為假手術(shù)組、模型組、EPO組、tPA組、EPO+tPA組、salubrinal組，制備大鼠腦I/R模型，采用大腦中動脈局部注射（middle cerebral artery infusion，MCAI）EPO（800IU/kg）的方法，tPA（10mg/kg）經(jīng)尾靜脈注射，salubrinal提前30min腹腔注射，模型組經(jīng)MCAI注射相同體積的鹽水替代EPO。缺血2h后進行再灌注，再灌注24h對大鼠進行神經(jīng)行為學(xué)評分后處死，TTC（tetrazolium chloride，TTC）染色計算梗死體積、腦水腫比例，Western blot、免疫熒光方法檢測腦組織和腦微血管AQP4、caspase-3、緊密連接蛋白（tight junction protein，TJP）claudin-5和occludin以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress，ERS）相關(guān)蛋白GRP78、ATF6α和CHOP的表達。 結(jié)果 1、EPO聯(lián)合tPA或單獨應(yīng)用EPO減輕大腦I/R損傷：檢測腦梗死體積，腦水腫和神經(jīng)功能缺損評分，與模型組相比，單獨應(yīng)用tPA對I/R損傷沒有任何作用；單獨應(yīng)用EPO一定程度上減少了腦梗死體積，減輕了腦水腫和神經(jīng)功能缺損（P0.05）；EPO聯(lián)合tPA較單獨應(yīng)用tPA明顯減輕I/R后腦梗死體積，腦水腫和神經(jīng)功能缺損（P0.05）。 2、EPO聯(lián)合tPA或單獨應(yīng)用EPO減少I/R后AQP-4、caspase-3及ERS相關(guān)蛋白表達：Western-blot檢測AQP4和caspase-3表達結(jié)果顯示，模型組和單獨應(yīng)用tPA的AQP4和caspase-3表達水平在I/R損傷后24h明顯升高（P0.05），而EPO聯(lián)合tPA或單獨應(yīng)用EPO明顯降低了AQP4和caspase-3的表達（P0.05）。Western-blot檢測GRP78和CHOP的表達結(jié)果顯示，I/R后模型組和單獨應(yīng)用tPA的GRP78和CHOP表達明顯增高（P0.05），而EPO聯(lián)合tPA治療或單獨應(yīng)用EPO明顯降低了GRP78和CHOP表達（P0.05）。 3、EPO聯(lián)合tPA或單獨應(yīng)用EPO減少I/R后大腦微血管內(nèi)緊密蛋白降解：Western-blot結(jié)果顯示I/R后模型組和單獨應(yīng)用tPA的大腦微血管中Claudin-5和Occludin表達明顯減少（P0.05），而EPO聯(lián)合tPA或單獨應(yīng)用EPO明顯抑制了Claudin-5和Occludin表達降低（P0.05），免疫熒光染色結(jié)果顯示模型組和單獨應(yīng)用tPA的Claudin-5和Occludin在內(nèi)皮細胞上的表達明顯減少，而EPO聯(lián)合tPA或單獨應(yīng)用EPO明顯減少了Claudin-5和Occludin的降解。 4、EPO聯(lián)合tPA或單獨應(yīng)用EPO抑制I/R后大腦微血管的ERS：Western-blot檢測大腦微血管內(nèi)GRP78和CHOP的表達結(jié)果顯示，I/R后模型組和單獨應(yīng)用tPA中的GRP78和CHOP的表達明顯增高（P0.05），而EPO聯(lián)合tPA或單獨應(yīng)用EPO較tPA組明顯降低了GRP78和CHOP的表達（P0.05）。 5、EPO聯(lián)合tPA或單獨應(yīng)用EPO抑制腦組織和大腦微血管的ERS信號通路：Western-blot檢測腦組織和大腦微血管的ERS通路中CHOP上游蛋白ATF6α的表達，結(jié)果顯示在兩種組織中I/R后模型組和單獨應(yīng)用tPA中的ATF6α的表達明顯增高（P0.05），而EPO聯(lián)合tPA或單獨應(yīng)用EPO明顯降低了ATF6α表達（P0.05）。 結(jié)論 1、EPO聯(lián)合tPA治療對大腦I/R后損傷具有神經(jīng)保護作用。 2、EPO聯(lián)合tPA治療可以減少大腦I/R后的凋亡并減輕血腦屏障破壞。 3、ERS信號通路ATF6α-CHOP的抑制可能參與了EPO聯(lián)合tPA治療保護作用機制。
[Abstract]:Purpose In recent years , it has been found that erythropoietin ( EPO ) may have neuroprotection effect on cerebral ischemia . However , it is difficult for EPO to pass through the blood brain barrier , requiring a large dose of systemic injection , thereby causing serious side effects to limit the clinical application of ischemic stroke patients . method 鏂規(guī)硶

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本文編號：1510063