本文關鍵詞： 膠質瘤 雷帕霉素 靜電紡絲 局部釋放 細胞活性　出處：《山東大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究目的以聚氧化乙烯/外消旋聚乳酸(PEO/PDLLA)為緩釋載體材料,制作安全有效的搭載雷帕霉素(Rapa)藥物的緩釋系統(tǒng),使藥物緩慢平穩(wěn)的從載體中釋放,減少藥物突釋現(xiàn)象對局部神經(jīng)系統(tǒng)的副作用,通過體外細胞活性實驗探究對U87及U251膠質瘤細胞的抗腫瘤作用。方法(1)通過靜電紡絲技術制作不同材料配比的未載藥纖維膜以確定最佳材料配比后制作加載含有不同藥物濃度PEO/PDLLA-Rapa載藥纖維膜,應用掃描電鏡(SEM)對紡絲纖維進行表征觀察;采用X線衍射(XRD)及傅立葉轉換紅外光譜(FT-IR)分析雷帕霉素在載藥紡絲纖維中的狀態(tài);測量纖維膜的水接觸角評價載藥纖維的親水性及疏水性。(2)分析纖維膜中藥物的包封率及載藥量。將一定量不同濃度雷帕霉素的載藥纖維膜放入含有5mL磷酸鹽緩沖液(PBS)的15mL離心管中,固定于37℃,轉速為60rpm/min的恒溫水浴搖床中。在特定的時間段更換PBS緩沖液,采用高效液相色譜法(HPLC)測定不同時間段內(nèi)PBS中藥物的含量。根據(jù)不同緩釋時間段內(nèi)Rapa的量及累計藥物緩釋量得出藥物緩釋曲線。并在持續(xù)放置3d及7d時取出纖維膜通過SEM觀察纖維的降解狀況。(3)將鉆60消毒滅菌后的空白PEO/PDLLA、0.5%載藥、1%載藥及2%載藥的PEO/PDLLA膜分別置于已移入U251及U87細胞貼壁后的96孔板中,每天更換培養(yǎng)液,將其放入培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)1、3、5、7天,在不同時間段后取出培養(yǎng)液和載藥纖維,用CCK-8法測定細胞活性。結果在確定合適的材料配比后,電鏡觀察纖維表面光滑,直徑相對均一穩(wěn)定。纖維表面未見明顯藥物結晶。紅外光譜證實在藥物溶解于有機溶劑后及在靜電紡絲過程中藥物的功能性化學基團仍然存在未受影響。在XRD的結果中可發(fā)現(xiàn)由于加入的藥物量在纖維膜中的比例很小,使其在纖維中未見明顯結晶,混合后的纖維結晶度均低于各自材料本身的結晶度。纖維膜的降解過程也與緩釋曲線較一致。三種載藥纖維膜在體外細胞實驗中均表現(xiàn)出一定的持續(xù)抑制腫瘤細胞增殖的能力,由于載藥量的不同,表現(xiàn)出不同的釋放速率及釋放時間。其中2wt%載藥膜表現(xiàn)出更穩(wěn)定且持續(xù)的抗腫瘤活性,且突釋現(xiàn)象不明顯。結論應用可降解生物材料PEO/PDLLA制作搭載Rapa的藥物緩釋系統(tǒng)是切實可行的,其理化性能良好,在一定范圍內(nèi)增加載藥量可延長藥物的緩釋時間且更加穩(wěn)定。其中2%載藥的纖維膜表現(xiàn)出更加穩(wěn)定的藥物釋放及抗腫瘤活性,突釋現(xiàn)象不明顯,可作為膠質瘤手術后局部化療的良好載體。
[Abstract]:Objective to prepare a safe and effective delivery system for rapamycin Rapa with poly (ethylene oxide) / racemic polylactic acid (PEO / PDLLAA) as sustained-release carrier. Drug release from the carrier slowly and steadily, reducing the drug release phenomenon on the local nervous system side effects. To explore the anti-tumor effect of U87 and U251 glioma cells in vitro. The unloaded fiber membrane with different ratio of materials was made by electrospinning technology to determine the best ratio of materials and then the film containing different concentration of PEO/PDLLA-Rapa was made. Scanning electron microscope (SEM) was used to characterize the spinning fiber. X-ray diffraction (XRD) and Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR) were used to analyze the state of rapamycin in drug-loaded spinning fiber. Evaluation of hydrophilicity and hydrophobicity of drug-loaded fiber by measuring water contact angle of fiber membrane. The encapsulation efficiency and drug loading capacity of the drugs in the fiber membrane were analyzed. A certain amount of rapamycin loaded fiber membrane was put into a 15ml centrifuge tube containing 5 mL phosphate buffer solution (PBS). Fixed at 37 鈩，

本文編號：1491272