本文關(guān)鍵詞： 腦血管痙攣 縫隙連接通道 18β-甘草次酸 全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)　出處：《石河子大學(xué)》2014年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 研究自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH）后不同時(shí)間段大鼠基底動(dòng)脈縫隙連接通道(GJ)變化與腦血管痙攣(CVS)的關(guān)系,即觀察基底動(dòng)脈（BAs）在SAH后不同時(shí)間段基底動(dòng)脈縫隙連接通道電生理變化及檢測(cè)縫隙連接蛋白（conexins Cxs）表達(dá)變化與CVS的關(guān)系，且給予縫隙連接阻斷劑18β-甘草次酸對(duì)該通道的調(diào)節(jié)作用,為更深入研究SAH后CVS的發(fā)生機(jī)制奠定理論依據(jù)，為今后臨床病人SAH后CVS的預(yù)防及治療提供新的藥物靶點(diǎn)和途徑。 方法： 實(shí)驗(yàn)分組：Sprague Dawley大鼠共120只,隨機(jī)數(shù)字表法分4組：對(duì)照組（n=30）、假手術(shù)組（n=30）、手術(shù)組（n=30）、治療組（n=30），，每組隨機(jī)數(shù)字表法分成5亞組（n=6），即第1d、3d、5d、7d、14d。 模型建立及藥物處理：同種型雄性Sprague Dawley大鼠采用視交叉前池二次注血法建立SAH模型，治療組二次注血后第1d腹腔注射縫隙連接阻斷劑18β-甘草次酸（10mg/kg）進(jìn)行干預(yù)，以后每日一次，直至各時(shí)間段處死。 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分：參考Kaoutzanis M等的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分法，從運(yùn)動(dòng)反應(yīng)、睜眼反應(yīng)及飲食三方面分別對(duì)各組模型鼠術(shù)后第1d、3d、5d、7d、14d對(duì)模型大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，評(píng)分范圍3至11分，3分最差，11分正常。 模型鑒定：各組模型鼠麻醉后，取腦于10%福爾馬林溶液中固定24h行HE染色。光鏡下觀察蛛網(wǎng)膜下腔出血及血管形態(tài)學(xué)變化。 腦血管直徑測(cè)量：各組模型鼠麻醉后，斷頭取腦將剝?nèi)?-3mm基底動(dòng)脈移入灌流槽內(nèi)固定。用Myoview軟件控制血管內(nèi)壓力穩(wěn)定在60mmHg、溫度37℃，測(cè)基底動(dòng)脈外徑。 腦血管Cxs表達(dá)檢測(cè)：各組模型鼠麻醉后，斷頭取腦于0.9%生理鹽水中，解剖顯微鏡下剝?nèi)ツX血管液氮速凍，提取總蛋白，western blotting技術(shù)檢測(cè)Cx37、Cx40、Cx43、Cx45。 觀察GJ電導(dǎo)率變化：不同時(shí)間段麻醉模型鼠，剝?nèi)ブ睆?0-80um，長(zhǎng)0.4mm腦血管，進(jìn)行消化處理后，使用AXON700B放大器在電壓膜片鉗下記錄一段腦微血管縫隙連接通道電生理變化。 結(jié)果： 建立SAH模型及鑒定：SAH后通過(guò)HE染色后光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)蛛網(wǎng)膜下腔可見(jiàn)大量陳舊性積血，SAH后基底動(dòng)脈明顯痙攣，形態(tài)學(xué)發(fā)生明顯變化，給予18β-甘草次酸后明顯緩解。 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分變化：SAH后大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分第3d開(kāi)始下降，至第7d降至最低，第14d出現(xiàn)恢復(fù)，給予18β-甘草次酸后明顯改善。 基底動(dòng)脈直徑測(cè)量：SAH后基底動(dòng)脈外徑第1d開(kāi)始縮窄，至第7d達(dá)最小，第14d開(kāi)始恢復(fù)變粗，給予18β-甘草次酸后明顯變粗。 腦血管縫隙連接蛋白表達(dá)： 1）Cx37蛋白未檢測(cè)到。 2）Cx40蛋白表達(dá)檢測(cè)：SAH后第3dCx40蛋白表達(dá)濃度開(kāi)始下降，至第7d達(dá)最低值，第14d開(kāi)始恢復(fù)升高，治療組未見(jiàn)顯著變化。 3）Cx43、Cx45蛋白表達(dá)檢測(cè)：SAH后第1dCx43蛋白表達(dá)濃度開(kāi)始升高，至第7d達(dá)最高值，第14d開(kāi)始降低，治療組未見(jiàn)顯著變化。 縫隙連接通道電導(dǎo)率變化：SAH后第1d縫隙連接通道電導(dǎo)率開(kāi)始升高，至第7d達(dá)最高值，第14d開(kāi)始降低，治療組未見(jiàn)顯著變化。 結(jié)論： 視交叉前池二次注血法可以成功建立蛛網(wǎng)膜下腔出血模型。 SAH后CVS的發(fā)生與腦血管GJ形態(tài)結(jié)構(gòu)及電生理變化相關(guān)。 18β-甘草次酸可緩解SAH后CVS的發(fā)生，其機(jī)制可能與腦血管GJ變化相關(guān)。
[Abstract]:Objective:
Study of spontaneous subarachnoid hemorrhage (SAH) after different time gap junction channels in rat basilar artery (GJ) and the changes of cerebral vasospasm (CVS) relationship, the observation of basilar artery (BAs) in SAH after different time of basilar artery connecting channel electrophysiological changes and detection of connexin (conexins Cxs) the relationship between the expression and change of CVS, and give the regulation of gap junction blocking agent 18 beta glycyrrhetinic acid on the channel, laying the theoretical basis for further study the mechanism of CVS after SAH, for the prevention and treatment of CVS in patients after SAH to provide new drug targets and approaches.
Method錛

本文編號(hào)：1455211