本文關(guān)鍵詞： 禁食 內(nèi)皮祖細(xì)胞 細(xì)胞治療 血管新生　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的:腦卒中是全球性重大疾病,是致死和致殘的主要原因之一;由于腦卒中會導(dǎo)致機體功能性的損傷,給患者及其家庭和社會帶來巨大的經(jīng)濟消耗。缺血性腦卒中是由大腦動脈的栓塞或血栓栓塞導(dǎo)致,從而導(dǎo)致腦部的血流量減少,進而又會導(dǎo)致腦部的缺血損傷。缺血性腦卒中患者的大腦缺血損傷部位病理學(xué)上可分為兩部分:一部分是不可逆的梗死腦組織區(qū)域,另一部分是處于缺血狀態(tài)但未完全梗死的區(qū)域,稱為半影區(qū)。所有缺血腦卒中治療的目的都是為了恢復(fù)半影區(qū)的血流量,通過半影區(qū)血液再灌注,抑制缺血進展,減少最終核心梗死區(qū)域面積的大小。內(nèi)皮祖細(xì)胞是來源于骨髓的干細(xì)胞,在生理或病理因素刺激下,它們可以被招募至缺血損傷部位,促進內(nèi)皮的再生和新生血管的形成。近年來,干細(xì)胞方面的研究提示,細(xì)胞治療有望成為疾病治療的一種有效手段;而內(nèi)皮祖細(xì)胞移植治療可能為缺血性腦卒中患者提供新的治療方案。對于缺血性腦卒中的治療,除了必要的醫(yī)療手段,飲食等生活習(xí)慣的干涉也至關(guān)重要。最新研究表明,一定程度的禁食可能會產(chǎn)生一系列生理益處。禁食屬于熱量限制的一種,其方式有間歇性禁食、長時間禁食等。長時間禁食為持續(xù)兩天及以上的禁食,文獻(xiàn)報道可以有效保護正常細(xì)胞及器官,幫助對抗各種毒素和毒性環(huán)境。我們前期研究發(fā)現(xiàn),長時間禁食(禁食兩天)可以改善小鼠的腦缺血損傷,本課題旨在進一步研究禁食改善小鼠腦部缺血損傷的機制,研究其是否是通過加強內(nèi)皮祖細(xì)胞介導(dǎo)的血管新生實現(xiàn)的。研究內(nèi)容及結(jié)果:1.禁食(兩天)可顯著改善缺血性腦卒中小鼠的內(nèi)皮祖細(xì)胞功能為了檢測禁食是否能夠促進缺血性腦卒中小鼠中內(nèi)皮祖細(xì)胞的功能,我們用電凝法凝斷小鼠左側(cè)大腦中動脈,制作小鼠缺血性腦卒中模型;模型成功后隨機將小鼠分成兩組,一組為禁食組,一組為任意飲食組;經(jīng)過處理后,提取兩組小鼠骨髓來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞,測試內(nèi)皮祖細(xì)胞的功能;并且測試內(nèi)皮祖細(xì)胞的中的NO和O2-的水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn),相比于任意飲食組缺血性腦卒中小鼠的內(nèi)皮祖細(xì)胞,禁食組缺血性腦卒中小鼠的內(nèi)皮祖細(xì)胞的遷移、粘附、小管形成功能均顯著改善,禁食組缺血性腦卒中小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞中的NO水平顯著提高,O2-水平顯著降低。2.禁食(兩天)可顯著加強內(nèi)皮祖細(xì)胞移植對缺血性腦卒中小鼠的治療作用為了檢測功能加強的內(nèi)皮祖細(xì)胞能否改善缺血性腦卒中小鼠的腦部缺血損傷,提取來源于禁食組和任意飲食組小鼠骨髓來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞,重新制作一批缺血性腦卒中小鼠模型,將禁食組來源的和任意飲食組來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞,通過尾靜脈注射移入缺血性腦卒中模型小鼠中,檢測內(nèi)皮祖細(xì)胞移植后缺血性腦卒中小鼠第一天和第三天神經(jīng)行為學(xué)變化,以及內(nèi)皮祖細(xì)胞移植后第三天缺血性腦卒中小鼠腦梗體積的大小。內(nèi)皮祖細(xì)胞移植后第三天檢測腦梗體積發(fā)現(xiàn),內(nèi)皮祖細(xì)胞可以顯著降低缺血性腦卒中小鼠的腦梗面積,改善缺血性腦卒中小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞移植后第一天與第三天的神經(jīng)行為學(xué)功能,并且禁食組小鼠的內(nèi)皮祖細(xì)胞比任意飲食組小鼠的內(nèi)皮祖細(xì)胞有更強的作用。3.禁食(兩天)可以增強內(nèi)皮祖細(xì)胞對缺血性腦卒中小鼠腦損傷部位血管新生的促進作用為了檢測移植的內(nèi)皮祖細(xì)胞能否歸巢于腦部缺血損傷部位,我們提取來源于禁食組和任意飲食組小鼠骨髓來源的epcs,并通過免疫組化熒光雙標(biāo)實驗,用brdu對內(nèi)皮祖細(xì)胞進行標(biāo)記,對植入缺血性腦卒中小鼠的內(nèi)皮祖細(xì)胞進行示蹤,并且檢測缺血性腦卒中小鼠在內(nèi)皮祖細(xì)胞移植治療后的第三天的血管新生情況。結(jié)果顯示,在缺血性腦卒中小鼠腦部缺血部位發(fā)現(xiàn)被brdu標(biāo)記的內(nèi)皮祖細(xì)胞,并且禁食組來源的標(biāo)記的內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)目比任意飲食組來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞多;brdu標(biāo)記的內(nèi)皮祖細(xì)胞與cd31標(biāo)記的新生血管共處;內(nèi)皮祖細(xì)胞移植治療三天后發(fā)現(xiàn),禁食組來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞治療后的腦部缺血區(qū)域新生血管的數(shù)量比任意飲食組的增多,并且有顯著差異。4.禁食(兩天)可以增強內(nèi)皮祖細(xì)胞條件培養(yǎng)基對缺血性腦卒中小鼠的治療作用內(nèi)分泌細(xì)胞分泌的因子進入組織液,彌散至鄰近的靶細(xì)胞,調(diào)節(jié)其機能,此方式稱旁分泌。內(nèi)皮祖細(xì)胞的條件培養(yǎng)基是指包含內(nèi)皮祖細(xì)胞旁分泌因子的培養(yǎng)基,在以往的研究中通常用細(xì)胞的條件培養(yǎng)基作為工具研究細(xì)胞的旁分泌作用。為了檢測內(nèi)皮祖細(xì)胞的旁分泌對缺血性腦卒中小鼠缺血損傷的作用,提取禁食組和任意飲食組小鼠的內(nèi)皮祖細(xì)胞,分別收集內(nèi)皮祖細(xì)胞的條件培養(yǎng)基。將禁食組以及任意飲食組的內(nèi)皮祖細(xì)胞的條件培養(yǎng)基通過尾靜脈注射入缺血性腦卒中小鼠中。檢測注射一天后,缺血性腦卒中小鼠腦梗體積的大小以及神經(jīng)行為學(xué)變化。內(nèi)皮祖細(xì)胞條件培養(yǎng)基治療可以顯著減輕小鼠的腦缺血損傷,禁食組來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞的條件培養(yǎng)基比任意飲食組小鼠的內(nèi)皮祖細(xì)胞的條件培養(yǎng)基對于缺血性腦卒中小鼠的治療作用更為顯著,腦梗體積顯著減少,神經(jīng)行為學(xué)功能改善更顯著。結(jié)論:1.禁食(兩天)可以顯著改善缺血性腦卒中小鼠中內(nèi)皮祖細(xì)胞的遷移、粘附、小管形成功能。2.禁食(兩天)可以顯著加強內(nèi)皮祖細(xì)胞對于缺血性腦卒中小鼠腦部缺血損傷的治療作用。3.禁食(兩天)可以增強內(nèi)皮祖細(xì)胞對缺血性腦卒中小鼠腦損傷部位血管新生的促進作用4.禁食(兩天)可以顯著增強內(nèi)皮祖細(xì)胞條件培養(yǎng)基對于缺血性腦卒中小鼠的治療作用。綜上所述,禁食改善缺血性腦卒中小鼠的腦部缺血損傷可能部分與其增強內(nèi)皮祖細(xì)胞介導(dǎo)的缺血性血管新生和加強內(nèi)皮祖細(xì)胞的旁分泌功能有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R743.3

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