發(fā)布時間：2017-12-29 02:10

  本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)錄因子EB在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞自噬中的作用　出處：《蘇州大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景:肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)是一類成年發(fā)病并且伴隨進行性發(fā)展的神經(jīng)退行性疾病,目前尚無有效的治療方法。自噬對于此類疾病中出現(xiàn)的毒性蛋白聚集的質(zhì)量控制具有重要意義,而轉(zhuǎn)錄因子EB(TFEB)是調(diào)控自噬的主要角色。目的:研究氧化條件下TFEB對細(xì)胞自噬調(diào)控的影響,以及該影響是否依賴于TFEB自身的氧化修飾,并在此基礎(chǔ)上找出TFEB上可能的氧化修飾位點以及氧化應(yīng)激條件下TFEB入核的機制。方法:在HEK293細(xì)胞中分別過表達(dá)帶有綠色熒光蛋白的野生型和突變了可能存在氧化修飾的位點的TFEB的質(zhì)粒,分別對野生型和突變型以過氧化氫(雙氧水)、加藥(mTOR抑制劑Torin-1)和饑餓處理,使用熒光顯微鏡、核質(zhì)分離實驗和Western Blotting(蛋白質(zhì)免疫印跡法)等實驗方法檢測TFEB在胞質(zhì)胞核中的分布以及細(xì)胞自噬的水平。雙熒光法監(jiān)測自噬流。用免疫共沉淀來驗證雙氧水影響TFEB與Rag GTPases的結(jié)合。結(jié)果:雙氧水處理條件下,短時間內(nèi),野生型TFEB迅速進核,而突變型TFEB大部分停留在胞質(zhì)中,并且突變型自噬水平的升高明顯低于野生型;Torin-1和饑餓分別處理條件下,野生型和突變型TFEB的入核需要較長時間。雙氧水誘導(dǎo)自噬增加。加入雙氧水后TFEB與Rag GTPases的結(jié)合消失。結(jié)論:(1)氧化條件下,短時間內(nèi)TFEB主要通過自身氧化導(dǎo)致其入核從而上調(diào)細(xì)胞自噬,此時TFEB的入核途徑不同于mTOR抑制條件下及饑餓條件下的入核途徑。(2)實驗所設(shè)計的突變體順利找到并證實了TFEB上的氧化修飾位點,該位點的存在使得TFEB可直接通過自身氧化修飾位點的氧化而迅速產(chǎn)生入核的應(yīng)答。(3)雙氧水破壞TFEB與Rag GTPases的結(jié)合進而TFEB入核
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R744.8

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