本文關鍵詞：采用流式細胞術分選EAE模型小鼠小膠質細胞　出處：《中國醫(yī)藥生物技術》2016年04期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的獲取實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)模型小鼠小膠質細胞,并檢測其特性。方法取8周齡,雌性C57BL/6小鼠行EAE造模,待至發(fā)病高峰期(第15天)時以PBS灌注后取小鼠后腦和脊髓,切碎后加胰酶消化,消化完成后通過100μm濾網濾過,而后采用Percoll密度梯度離心法分離獲取單個核細胞,進一步利用CD11b與CD45抗體染色,通過流式細胞儀分選CD11b~+CD45~(high)和CD11b~+CD45~(low)細胞,即分別得到相對活化和靜息的小膠質細胞,最后對流式分選獲取的小膠質細胞行qPCR檢測。結果通過形態(tài)比較,獲得了高純度的小膠質細胞。FIZZ-1基因行qPCR檢測,結果顯示在EAE急性期M2型小膠質細胞明顯增多,符合文獻報道。結論該方法能從EAE小鼠體內分離獲取高純度的小膠質細胞,可用于相關目的基因后續(xù)檢測。
[Abstract]:Objective to obtain microglia in experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model in mice and to detect its characteristics. Methods 8 week old female C57BL/6 mice EAE model, to the peak incidence (fifteenth days) with PBS perfusion after cerebral and spinal mouse, chopped after trypsin digestion, the digestion is completed by 100 m filter filtration, and then using Percoll density gradient centrifugation to obtain mononuclear cells, further use CD11b and CD45 antibody staining by flow cytometer (high) and CD11b~+CD45~ CD11b~+CD45~ (low) cells, which are relatively activated and resting microglia and microglia for qPCR. Finally get convection type sorting test. Results the microglia with high purity were obtained by comparison of the morphology. The FIZZ-1 gene was detected by qPCR. The results showed that the number of M2 microglia increased significantly in the acute phase of EAE, which was reported in the literature. Conclusion this method can be isolated from EAE mice to obtain high purity microglia and can be used for subsequent detection of related target genes.
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學神經生物學教研室教育部分子神經生物學重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金面上項目(81371326)
【分類號】：R-332;R744.5
【正文快照】： 小膠質細胞在中樞神經系統(tǒng)中約占12%[1],是中樞主要的固有免疫細胞。靜息狀態(tài)下的小膠質細胞主要發(fā)揮中樞神經系統(tǒng)的監(jiān)視作用。中樞的病理損傷可以激活小膠質細胞,發(fā)生形態(tài)學和分子表達譜的變化,參與吞噬、抗原呈遞、調節(jié)血腦屏障和調控炎癥反應強度等多種作用。作為中樞神經

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本文編號：1338951