本文關(guān)鍵詞：依達(dá)拉奉對SAH大鼠海馬區(qū)JNK-自噬信號(hào)通路的影響　出處：《華北理工大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的1探討依達(dá)拉奉對蛛網(wǎng)膜下腔出血(Subarachnoid Hemorrhage,SAH)大鼠海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞自噬的影響。2探討依達(dá)拉奉對SAH大鼠海馬區(qū)JNK-自噬信號(hào)通路的影響。方法將雄性清潔級健康SD大鼠192只(350~450g)采用隨機(jī)方式等分配給假手術(shù)組(Sham組)、SAH模型組(SAH組)、SAH結(jié)合應(yīng)用JNK抑制劑組(JNK組)、SAH聯(lián)合應(yīng)用依達(dá)拉奉干預(yù)組(Edaravone組)四個(gè)組。利用顱內(nèi)動(dòng)脈穿刺法制成大鼠SAH模型,Sham組只進(jìn)行顱內(nèi)動(dòng)脈造模術(shù)但不穿破血管);SP600125組于造模前30min,利用立體定向儀行側(cè)腦室注射SP600125溶液;Edaravone組在建模成功后予以依達(dá)拉奉干預(yù)治療,采用5mg/kg劑量進(jìn)行腹腔注射,12 h后重復(fù)給藥一次,直至大鼠被處死。每大組又按6h、24h、72h、144 h時(shí)間點(diǎn)分為四個(gè)亞組。通過對4組大鼠前肢拉力進(jìn)行比較;以及穿梭箱實(shí)驗(yàn)來測定每組大鼠各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的被動(dòng)逃避時(shí)間(Passive avoidance latency,PAL)以及主動(dòng)回避反應(yīng)率(Active avoidance reaction rate,AARR)從整體上評價(jià)各組大鼠行為學(xué)的改變情況。觀測HE染色后每組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元形狀及數(shù)量變化;應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法及Western-Blot法檢測p-JNK蛋白以及自噬標(biāo)志物Beclin-1和LC3-Ⅱ在大鼠海馬區(qū)的表達(dá)情況。結(jié)果1抓力測定實(shí)驗(yàn):與Sham組比較,SAH組在各時(shí)間點(diǎn)大鼠前肢拉力數(shù)值降低明顯,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與SAH組比較,SP600125組在各時(shí)間點(diǎn)拉力值均提高;Edaravone組在各時(shí)間點(diǎn)拉力值有所升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2穿梭箱實(shí)驗(yàn):同Sham組比較,SAH組在各時(shí)間點(diǎn)AARR的結(jié)果均呈現(xiàn)下降的趨勢,PAL明顯增加;與SAH組比較,SP600125組大鼠逃避能力增強(qiáng),躲避電擊次數(shù)明顯增多,AARR得以提升,PAL數(shù)值下降趨勢明顯,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Edaravone組各時(shí)間點(diǎn)AARR值提高明顯,PAL時(shí)間縮短顯著。3 HE染色結(jié)果:Sham組大鼠腦組織結(jié)構(gòu)完整,海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目多,形態(tài)無改變。與Sham組相比,SAH組在各時(shí)間點(diǎn)海馬區(qū)神經(jīng)元排列紊亂、數(shù)量明顯減少細(xì)胞多呈多邊形,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與SAH組比較SP600125組接近正常形態(tài)細(xì)胞明顯增多,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Edaravone組神經(jīng)元壞死率明顯下降、形態(tài)正常細(xì)胞數(shù)量開始增多,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4 Beclin-1、LC3-Ⅱ免疫組化與免疫印跡結(jié)果:免疫組化:Beclin-1、LC3-Ⅱ在Sham組中海馬區(qū)神經(jīng)元胞漿中呈低表達(dá)且不隨時(shí)間改變,SAH組陽性表達(dá)主要位于神經(jīng)元細(xì)胞胞質(zhì)。與Sham組比較,SAH組在各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)顯著上調(diào),6h表達(dá)增加24h表達(dá)達(dá)高峰,72h、144h時(shí)間點(diǎn)隨時(shí)間延長數(shù)目開始下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與SAH組比較,SP600125組在各時(shí)間點(diǎn)顯著降低,6h開始升高24h達(dá)高峰72h開始降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在Edaravone組海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞胞質(zhì)中表達(dá)水平明顯降低,6h開始升高24h達(dá)到高峰72h開始降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Western-Blot結(jié)果:Sham組中Beclin-1、LC3-Ⅱ表達(dá)量極低,且不隨時(shí)間變化而改變。與Sham組比較,SAH組均呈現(xiàn)高表達(dá)水平,6h開始表達(dá)升高,在24h達(dá)高峰,72h開始逐漸降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與SAH組比較,在SP600125組表達(dá)均降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Edaravone組各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)水平同樣出現(xiàn)下降趨勢,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5 p-JNK免疫組化與免疫印記結(jié)果:免疫組化結(jié)果:p-JNK陽性細(xì)胞主要存在于細(xì)胞核,僅少量表達(dá)于胞漿。Sham組中均呈較弱表達(dá),SAH組表達(dá)量明顯增加,6h表達(dá)增加,在24h達(dá)峰,72h開始逐漸降低(P0.05)。與SAH組比較,在SP600125組各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)均降低(P0.05),6h開始升高,24h達(dá)峰,72h開始降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Edaravone組表達(dá)水平均有所下降(P0.05),6h升高24h達(dá)頂峰72h后逐步平穩(wěn)減低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Western-Blot結(jié)果:Sham組基本無表達(dá);SAH組表達(dá)量顯著提高;與SAH組比較,SP600125組表達(dá)量下降趨勢明顯,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Edaravone組表達(dá)量也顯著下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1依達(dá)拉奉可抑制SAH后海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞Beclin-1和LC3-Ⅱ的表達(dá),從而降低SAH后早期腦損傷程度。2依達(dá)拉奉可抑制SAH后海馬區(qū)JNK信號(hào)過度激活,降低Beclin-1和LC3-Ⅱ的表達(dá),從而適當(dāng)降低自噬激活的程度對SAH后海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞具有保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R743.35
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本文編號(hào)：1321773