本文關(guān)鍵詞：大鼠腦缺血再灌注后Cathepsin L與p-JNK信號分子調(diào)控細(xì)胞凋亡的相關(guān)性研究

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【摘要】：目的:腦缺血再灌注損傷的機(jī)制與細(xì)胞凋亡息息相關(guān)。許多學(xué)者已證實(shí),溶酶體組織蛋白酶L(Cathepsin L)與JNK信號通路均對細(xì)胞凋亡發(fā)揮著重要作用。但二者對細(xì)胞凋亡的調(diào)控是否存在相關(guān)性,目前尚無研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)探討大鼠腦缺血再灌注后Cathepsin L與JNK信號通路中p-JNK信號分子調(diào)控細(xì)胞凋亡的相關(guān)性,以期為缺血性腦卒中的治療提供潛在的分子機(jī)制。方法:選用Longa線栓法制備大鼠右側(cè)大腦中動脈缺血再灌注損傷模型。實(shí)驗(yàn)動物選用清潔級健康雄性Sprague-Daeley(SD)大鼠(216只),體重控制在260~300g,周齡均在10~12周。按隨機(jī)原則將實(shí)驗(yàn)動物分成四個大組,即假手術(shù)組、腦缺血后再灌注模型組、p-JNK抑制劑組(SP600125)、Cathepsin L抑制劑組(Z-FY-DMK)。各組大鼠又以缺血后再灌注時(shí)間點(diǎn)分成2h、6h、12h、24h亞組。假手術(shù)組線栓插入血管深度為8~10mm,未造成大腦中動脈閉塞,其余操作與模型組一致。兩個抑制劑組分別于缺血前30分鐘側(cè)腦室內(nèi)注入JNK特異性抑制劑SP600125(30ug/10ul*10ul)、Cathepsin L特異性抑制劑Z-FY-DMK(20ug/1ul*5ul),留針10分鐘,假手術(shù)組及模型組中分別注入10ul的DMSO溶液。各組大鼠數(shù)量為假手術(shù)組、模型組、SP600125干預(yù)組、Z-FY-DMK干預(yù)組中2h、6h、12h亞組各12只大鼠、24h亞組各18只。每個亞組中各取12只大鼠分別行TUNEL法凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)、westernblotting蛋白檢測,另24小時(shí)亞組中再各取6只行ttc染色。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得:1.實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭谱鞒晒β蕿?3.72%。2.sp600125干預(yù)組、z-fy-dmk干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能缺損評分較模型組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯降低(p0.01)。3.模型組與干預(yù)組腦組織可見大小不等蒼白色梗死灶,假手術(shù)組未見明顯梗死灶。sp600125干預(yù)組大鼠相對梗死體積為15.27±1.28%,z-fy-dmk干預(yù)組大鼠相對梗死體積為14.80±1.64%,模型組大鼠相對腦梗死體積為28.05±1.04%,兩個干預(yù)組大鼠腦梗死體積均較模型組明顯減少(p0.01)。4.tunel法檢測各組大鼠右側(cè)大腦缺血皮質(zhì)區(qū)凋亡細(xì)胞表達(dá),假手術(shù)組可見極少量凋亡細(xì)胞表達(dá);模型組2h可見較多凋亡細(xì)胞表達(dá),6h、12h呈增高趨勢,24h達(dá)高峰,模型組各時(shí)間點(diǎn)凋亡細(xì)胞數(shù)與假手術(shù)組相比明顯增多(p0.01);sp600125及z-fy-dmk干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)凋亡細(xì)胞表達(dá)均較模型組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)減少(p0.01)。5.westernblotting檢測各組大鼠大腦缺血側(cè)皮質(zhì)區(qū)cathepsinl表達(dá),假手術(shù)組可見極少量cathepsinl蛋白表達(dá);模型組cathepsinl在2h表達(dá)最少,6h開始增多,12h達(dá)高峰,24小時(shí)較12h稍下降,模型組各時(shí)間點(diǎn)cathepsinl表達(dá)均較假手術(shù)組明顯增多(p0.01)。6.westernblotting檢測各組大鼠大腦缺血皮質(zhì)區(qū)p-jnk蛋白表達(dá),假手術(shù)組可見極少量p-jnk蛋白表達(dá);模型組2h、6h、12h、24h均可見p-jnk表達(dá)且與時(shí)間呈依賴關(guān)系,2h表達(dá)最低,6h、12h呈上升趨勢,24h達(dá)最高峰,模型組各時(shí)間點(diǎn)p-jnk蛋白表達(dá)均較假手術(shù)組明顯增多(P0.01)。7.Z-FY-DMK干預(yù)組中各時(shí)間點(diǎn)Cathepsin L蛋白表達(dá)較模型組明顯減少(P0.01)。Z-FY-DMK組2h、6h、12h、24h亞組中p-JNK蛋白表達(dá)較模型組明顯下降(P0.01)。8.SP600125干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)p-JNK蛋白表達(dá)均較模型組模型減少。SP600125干預(yù)組2h、6h、12h、24h亞組中Cathepsin L蛋白表達(dá)與模型組比較無顯著差異(P0.05)。9.運(yùn)用Spearman秩相關(guān)非參數(shù)檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法得出,模型組Ca-thepsin L與p-JNK蛋白之間存在正相關(guān)(r=0.754,P=0.001),Z-FY-DMK干預(yù)組中Cathepsin L與p-JNK蛋白存在正相關(guān)(r=0.813,P=0.001),提示Cathepsin L與p-JNK蛋白之間存在正相關(guān)關(guān)系。結(jié)論:1.Cathepsin L可能位于p-JNK信號分子上游共同調(diào)控細(xì)胞凋亡。2.Cathepsin L特異性抑制劑可抑制Cathepsin L、p-JNK蛋白表達(dá),減少腦梗死體積、減少凋亡細(xì)胞數(shù)、改善神經(jīng)功能評分,具有神經(jīng)保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R743

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

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本文編號：1303635