本文關(guān)鍵詞：空腸彎曲菌連續(xù)灌胃經(jīng)小鼠消化道定植后分離及分離株毒力變化的研究

  更多相關(guān)文章： 空腸彎曲菌 定植 生長(zhǎng)繁殖能力 運(yùn)動(dòng)能力 形態(tài)變化

【摘要】：目的:空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni,Cj)經(jīng)連續(xù)多批次小鼠灌胃消化道后,并在消化道定植、分離及排出,得到空腸彎曲菌定植分離株,與貯存空腸彎曲菌相比,其在消化道環(huán)境中革蘭氏染色形態(tài)變化、生長(zhǎng)繁殖能力及運(yùn)動(dòng)能力等毒力的有所不同,為了研究空腸彎曲菌分離株毒力變化規(guī)律;認(rèn)識(shí)不同毒力的空腸彎曲菌分離株致小鼠周?chē)窠?jīng)病變能力。方法:1復(fù)蘇及培養(yǎng)庫(kù)存空腸彎曲菌:從空腸彎曲菌菌株庫(kù)中選取lulei株作為實(shí)驗(yàn)菌株。從-80℃冰箱中取出置于-20℃冰箱中24小時(shí),再由-20℃冰箱至-4℃冰箱中24小時(shí),于室溫下溶化,數(shù)分鐘后,將菌液倒入裝有5ml滅菌布氏肉湯培養(yǎng)基的西林瓶中,放置于三氣培養(yǎng)箱中,在42℃微需氧(10%CO2、5%O2、85%N2)環(huán)境增菌24小時(shí),之后傳代至含7%脫纖維羊血的哥倫比亞血平板培養(yǎng)基,于相同環(huán)境條件下培養(yǎng)24小時(shí),并以同樣方法傳代至第3代,成功復(fù)蘇空腸彎曲菌。2空腸彎曲菌的鑒定:采用革蘭氏染色法,馬尿酸鈉水解試驗(yàn)以及多重PCR的分子方法鑒定空腸彎曲菌。3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇和分組方法:選用4周齡,體重為9-12g,雄性清潔級(jí)健康昆明小鼠。共分為18個(gè)批次,每一批次6只小鼠。4攻毒前對(duì)小鼠糞便進(jìn)行空腸彎曲菌的分離。5攻毒方式和濃度:經(jīng)口服灌胃小鼠3×108cfu/ml濃度的活菌菌懸液0.5ml,所有小鼠灌喂前均禁食水12小時(shí),灌胃后立即給予食水。6空腸彎曲菌分離培養(yǎng):將庫(kù)存空腸彎曲菌lulei株灌胃第一批次小鼠,灌胃1次,于灌胃后24小時(shí)和第7天、8天、9天,分時(shí)間點(diǎn)采集小鼠糞便,并從糞便中分離純化上述各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的空腸彎曲菌定植分離株。將分離純化得到的24小時(shí)空腸彎曲菌lulei分離株灌胃第二批次小鼠,以此類(lèi)推,直至完成18批次空腸彎曲菌的分離培養(yǎng)。7各時(shí)間點(diǎn)各批次空腸彎曲菌分離株間生長(zhǎng)繁殖能力、運(yùn)動(dòng)能力及革蘭染色形態(tài)變化觀(guān)察:細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖能力、運(yùn)動(dòng)能力和形態(tài)變化是評(píng)價(jià)細(xì)菌毒力的重要指標(biāo),分別采用細(xì)菌濁度測(cè)定法、運(yùn)動(dòng)環(huán)直徑法和革蘭染色的方法比較各空腸彎曲菌分離變異株間生長(zhǎng)繁殖能力、運(yùn)動(dòng)能力及革蘭染色形態(tài)變化的差異。8用統(tǒng)計(jì)軟件spss13.0分析各時(shí)間點(diǎn)各批次空腸彎曲菌分離株生長(zhǎng)繁殖速度及運(yùn)動(dòng)環(huán)直徑數(shù)據(jù)。9實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況的觀(guān)察:自購(gòu)買(mǎi)小鼠當(dāng)日起每天觀(guān)察小鼠的狀態(tài):如進(jìn)食水情況、精神狀態(tài)、皮毛光滑程度、體重及肢體活動(dòng)情況、大便性狀、有無(wú)腹瀉及肢體癱瘓等癥狀,觀(guān)察時(shí)間為30天,之后處死解剖動(dòng)物,如動(dòng)物在30天內(nèi)出現(xiàn)明顯癱瘓癥狀,及時(shí)解剖并取雙側(cè)坐骨神經(jīng)進(jìn)行神經(jīng)病理觀(guān)察。結(jié)果:1成功復(fù)蘇貯存空腸彎曲菌lulei株;2攻毒前昆明雄鼠糞便未分離出空腸彎曲菌;3獲得第1批次至第18批次24小時(shí)的灌胃空腸彎曲菌分離株;4第1批次至第7批次未分離到7天、8天、9天定植的空腸彎曲菌分離株;5自第8批次開(kāi)始空腸彎曲菌能夠在小鼠消化道內(nèi)定植;6獲得第8批次至第18批次7天、8天、9天的空腸彎曲菌定植分離株;7統(tǒng)計(jì)軟件spss13.0分析,采用kruskalwalltest、lsd統(tǒng)計(jì)方法分析,相同時(shí)間點(diǎn)不同批次分離株間單位時(shí)間內(nèi)生長(zhǎng)繁殖速度有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,隨著批次的增加空腸彎曲菌生長(zhǎng)繁殖能力與貯存空腸彎曲菌相比逐漸增強(qiáng),不同批次空腸彎曲菌分離株生長(zhǎng)繁殖能力相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;經(jīng)重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)分析不同時(shí)間點(diǎn)同一批次空腸彎曲菌定植分離株,單位時(shí)間內(nèi)生長(zhǎng)繁殖速度有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;8經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件spss13.0分析,采用kruskalwalltest、lsd統(tǒng)計(jì)方法分析,相同時(shí)間點(diǎn)不同批次分離株運(yùn)動(dòng)能力有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,各批次相同采集糞便的時(shí)間點(diǎn)分離得到的定植變異株,與貯存空腸彎曲菌相比,隨著批次的增加空腸彎曲菌分離株運(yùn)動(dòng)能力在一定范圍內(nèi)波動(dòng)變化,不同批次空腸彎曲菌分離株運(yùn)動(dòng)能力相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;經(jīng)重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)分析不同時(shí)間點(diǎn)同一批次分離株運(yùn)動(dòng)能力相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;9相同時(shí)間點(diǎn)不同批次空腸彎曲菌分離株間經(jīng)革蘭氏染色鏡檢觀(guān)察,菌體形態(tài)發(fā)生變化。隨著各時(shí)間點(diǎn)批次增加,空腸彎曲菌分離株菌體逐漸變細(xì)、變長(zhǎng),彎曲桿狀或螺旋桿狀程度逐漸明顯,呈雙“s”形或三“s”形;不同時(shí)間點(diǎn)同一批次空腸彎曲菌分離變異株間革蘭染色鏡檢觀(guān)察,形態(tài)發(fā)生變化,隨著時(shí)間點(diǎn)的增加,菌體逐漸變細(xì)、變長(zhǎng),彎曲桿狀或螺旋桿狀程度逐漸明顯;10小鼠一般情況的觀(guān)察:在灌胃后30天小鼠被處死時(shí)精神狀態(tài)好,活動(dòng)能力及進(jìn)食水情況如常,體重?zé)o明顯減輕,未出現(xiàn)腹瀉及癱瘓等癥狀。結(jié)論:1河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心清潔級(jí)昆明雄鼠糞便內(nèi)無(wú)空腸彎曲菌存在。2空腸彎曲菌灌胃小鼠一次24小時(shí)能夠分離得到分離株。3空腸彎曲菌灌胃小鼠一次能夠在小鼠體內(nèi)定植。4空腸彎曲菌灌胃小鼠一次7、8、9天后分離定植株,不是每一批次都能分離到。5空腸彎曲菌經(jīng)過(guò)小鼠體內(nèi)培養(yǎng)分離株形態(tài)發(fā)生變化,有短小變得細(xì)長(zhǎng)、彎曲桿狀或螺旋桿狀更明顯。6空腸彎曲菌經(jīng)過(guò)小鼠體內(nèi)培養(yǎng)分離株生長(zhǎng)繁殖速度變快。7空腸彎曲菌經(jīng)過(guò)小鼠體內(nèi)培養(yǎng)分離株大部分運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)。8空腸彎曲菌灌胃小鼠一次經(jīng)過(guò)小鼠體內(nèi)培養(yǎng),30天未能使小鼠出現(xiàn)腹瀉、癱瘓等臨床癥狀。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R745

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張建中;;空腸彎曲菌病[J];傳染病信息;2005年02期

2 高正琴;張強(qiáng);邢進(jìn);王春玲;賀爭(zhēng)鳴;邢瑞昌;;空腸彎曲菌套式PCR快速檢測(cè)方法的建立與初步應(yīng)用[J];中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志;2006年12期

3 袁寶君;吳高林;喬昕;戴建華;;多重PCR與傳統(tǒng)方法檢測(cè)空腸彎曲菌的比較研究[J];衛(wèi)生研究;2007年01期

4 欒軍;祝長(zhǎng)青;蔣原;金偉青;;空腸彎曲菌保存方法的比較[J];口岸衛(wèi)生控制;2007年04期

5 張茂俊;張建中;;空腸彎曲菌耐藥現(xiàn)狀[J];疾病監(jiān)測(cè);2007年12期

6 拜世英;;淺述空腸彎曲菌誘發(fā)格林-巴利綜合征的機(jī)制和防控[J];醫(yī)學(xué)與哲學(xué)(臨床決策論壇版);2010年03期

7 邢叢叢;李震中;白欣立;徐飛;付金生;馬海陽(yáng);李文倩;盧小衛(wèi);;空腸彎曲菌Penner O:19 galE基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;2012年02期

8 陸磊;焦新安;黃金林;;空腸彎曲菌細(xì)胞致死性腫脹毒素研究進(jìn)展[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2012年10期

9 邢麗萍;薛永春;楊月清;;空腸彎曲菌分型技術(shù)的研究進(jìn)展[J];公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué);2012年06期

10 劉孝波;蔣棟能;蒲曉允;;利用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法快速檢測(cè)空腸彎曲菌[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2013年08期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張弓;黃金林;焦新安;;空腸彎曲菌“活的非可培養(yǎng)狀態(tài)”研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2009學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2009年

2 韓茜倩;師以康;王鳳山;;在空腸彎曲菌表達(dá)N型糖蛋白的研究進(jìn)展[A];山東省藥學(xué)會(huì)2010年生化與生物技術(shù)藥物學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

3 高正琴;張強(qiáng);邢進(jìn);王春玲;賀爭(zhēng)鳴;邢瑞昌;;空腸彎曲菌套式PCR快速檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[A];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)第七屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

4 劉光明;蔡慧農(nóng);曹敏杰;蘇文金;;一種檢測(cè)活的非可培養(yǎng)狀態(tài)空腸彎曲菌的新型方法[A];提高全民科學(xué)素質(zhì)、建設(shè)創(chuàng)新型國(guó)家——2006中國(guó)科協(xié)年會(huì)論文集[C];2006年

5 薛峰;徐飛;陳穎;李震中;張睿;張常印;蔣原;李懷林;陸承平;;2006-2008年華東地區(qū)空腸彎曲菌動(dòng)物源分離株分子分型研究[A];動(dòng)物檢疫學(xué)分會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2010年

6 黃金林;許海燕;包廣宇;張弓;劉佩紅;姜峰;潘志明;劉秀梵;焦新安;;不同來(lái)源空腸彎曲菌分子流行病學(xué)分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2009學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2009年

7 劉光明;蔡慧農(nóng);曹敏杰;蘇文金;;一種檢測(cè)活的非可培養(yǎng)狀態(tài)空腸彎曲菌的新方法[A];中國(guó)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會(huì)第五屆年會(huì)暨第四屆東西方食品業(yè)高層論壇論文摘要集[C];2007年

8 王君;劉秀梅;郭云昌;;雞肉空腸彎曲菌標(biāo)準(zhǔn)制定過(guò)程中風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的應(yīng)用[A];達(dá)能營(yíng)養(yǎng)中心青年科學(xué)工作者論壇優(yōu)秀論文集2010年第5期[C];2010年

9 祝令偉;郭學(xué)軍;馮書(shū)章;;空腸彎曲菌蛋白質(zhì)組學(xué)研究概述[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)生物制品學(xué)分會(huì)中國(guó)微生物學(xué)會(huì)獸醫(yī)微生物學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)（第三屆中國(guó)獸藥大會(huì)學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

10 孫新婷;沈?qū)氥?侯鳳琴;于巖巖;;北京地區(qū)空腸彎曲菌的臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)全國(guó)第九次感染病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 曾繁玉;格林-巴利綜合征分子研究有重大突破[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 張茂俊;格林—巴利綜合征相關(guān)空腸彎曲菌遺傳特征分析[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2008年

2 田新英;吉蘭-巴雷綜合征相關(guān)空腸彎曲菌的蛋白質(zhì)譜特征分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2004年

3 馮永嘉;空腸彎曲菌粘附蛋白基因工程疫苗的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2003年

4 黃金林;我國(guó)部分地區(qū)雞源空腸彎曲菌流行病學(xué)及運(yùn)送flaA基因的殼聚糖納米DNA疫苗免疫生物學(xué)特性研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2008年

5 束曉梅;空腸彎曲菌galE基因變異株的臨床意義研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊靜;空腸彎曲菌致豚鼠不同時(shí)間段周?chē)窠?jīng)病理?yè)p傷的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張華威;空腸彎曲菌膜融合蛋白CmeA、外膜蛋白CmeC的表達(dá)、純化與結(jié)晶篩選[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

3 梁昊;空腸彎曲菌莢膜多糖遺傳特征及彎曲菌感染的宿主歸因分析[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2016年

4 王傳文;表達(dá)空腸彎曲菌保護(hù)性抗原cfrA、cjaA基因的重組乳酸菌的構(gòu)建及口服免疫研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 張瀟;不良狀態(tài)的空腸彎曲菌經(jīng)消化道感染豚鼠致周?chē)窠?jīng)病變[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

6 劉碩;空腸彎曲菌連續(xù)灌胃經(jīng)小鼠消化道定植后分離及分離株毒力變化的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

7 吳高林;空腸彎曲菌快速檢測(cè)方法建立和應(yīng)用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2007年

8 楊靜;空腸彎曲菌體外非理想條件下性狀變化評(píng)估[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

9 尹衍新;基于CjaA蛋白檢測(cè)雞空腸彎曲菌抗體的間接ELISA方法建立及其單克隆抗體研制[D];揚(yáng)州大學(xué);2010年

10 高愛(ài)民;空腸彎曲菌鐵相關(guān)受體基因序列的分析研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

，

本文編號(hào)：1245747