本文關(guān)鍵詞：煙酰胺單核苷酸對腦出血和腦梗出血轉(zhuǎn)化的作用和機制

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【摘要】：腦卒中是腦血液循環(huán)障礙引起的急性腦血管病,因為循環(huán)障礙的原因不同,可分為缺血性腦卒中(ischemic stroke)和出血性腦卒中(intracerebral hemorrhage,ICH)。缺血性腦卒中又叫腦梗死,約占全部卒中的80%。是由各種原因引起的局部腦組織供血障礙,導(dǎo)致缺血缺氧性的腦組織病變壞死,進而造成一系列的神經(jīng)功能損傷的疾病。在缺血性腦卒中的病理發(fā)展過程中,有一種狀態(tài)兼具缺血性腦卒中和出血性腦卒中的特征,即腦缺血出血轉(zhuǎn)化(hemorrhagic transformation,HT),在腦缺血病人中,出血轉(zhuǎn)化和升高的死亡率相關(guān)。缺血性腦卒中急性期的溶栓治療是目前唯一經(jīng)過美國FDA批準的治療方法。最常用的溶栓藥物是纖溶酶原激活劑(tissue-type plasminogen activator,t PA),其可有效改善患者的生存率和預(yù)后[1]。但由于其可增加出血性轉(zhuǎn)化的發(fā)生率,以及在超過腦梗后4.5小時使用會極大地增加出血幾率,溶栓治療方法的使用受到諸多限制。因此,研發(fā)與t PA聯(lián)合使用,以降低其導(dǎo)致的出血性轉(zhuǎn)化,或可延長其使用時間窗的藥物具有極大的臨床應(yīng)用潛力。腦出血是致命的卒中類型,有較高的發(fā)病率和死亡率[2],約占全部卒中的10~15%。有報道指出,腦出血發(fā)病后一月死亡率約為40%,過去二十年醫(yī)療水平的提高并不能降低該死亡率[3]。腦出血的高復(fù)發(fā)率和致死率的原因是由于缺乏有效的治療選擇,因為現(xiàn)有的臨床治療方法還僅限于初級治療,如控制顱內(nèi)壓、治療血腫和維持血流動力學(xué)穩(wěn)定[2,4],因此研究有效的治療方法極為重要。煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,簡稱Nampt,是哺乳動物細胞內(nèi)NAD(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸)合成的限速酶,可調(diào)控NAD的濃度。本課題組在小鼠腦缺血模型上的研究發(fā)現(xiàn),Nampt可以通過控制NAD的合成來調(diào)控SIRT1的去乙�；芰�,進一步調(diào)節(jié)AMPK的上游激酶LKB1的乙�；图毎麅�(nèi)的重分布,最終調(diào)節(jié)AMPK活性,發(fā)揮神經(jīng)保護作用[5]。此外,我們還發(fā)現(xiàn):Nampt酶產(chǎn)物煙酰胺單核苷酸,即NMN可以通過腦室給藥在大鼠線栓法大腦中動脈堵塞模型(MCAO)中發(fā)揮神經(jīng)保護作用,改善動物神經(jīng)學(xué)功能。主要包括:腦梗體積縮小、神經(jīng)功能缺陷減輕、半影區(qū)細胞死亡減少[6]。在線栓法MCAO再灌注小鼠模型上,NMN腹腔注射(500mg/Kg),每天1次,連續(xù)給藥1周以上,可顯著降低腦卒中死亡率,促進腦卒中后神經(jīng)再生、功能恢復(fù)[7]。本課題利用不同的動物模型和更貼近臨床的給藥方法進一步驗證了NMN在缺血性腦卒中中的作用。構(gòu)建了腦梗出血轉(zhuǎn)化模型和腦出血模型,并探索NMN在這兩種模型中的作用和機制。實驗方法一、在腦梗和腦梗出血轉(zhuǎn)化模型研究中用到的方法1.利用電擊凝斷大腦中動脈,構(gòu)建電凝法MCAO模型;2.栓線經(jīng)頸內(nèi)動脈入顱,堵塞大腦中動脈,構(gòu)建線栓法MCAO模型;3.利用TTC染色,連續(xù)切片法計算腦梗死體積;4.在p MCAO模型中,梗死后5h給t PA,誘導(dǎo)腦梗出血轉(zhuǎn)化;5.利用Quanti ChromTM Hemoglobin Assay Kit檢測腦組織血紅蛋白含量。二、在腦出血模型的研究中用到的方法1.利用腦立體定位技術(shù),向紋狀體注射0.05U膠原酶IV,誘導(dǎo)腦出血模型;2.利用平衡木實驗,評價小鼠神經(jīng)功能;3.利用連續(xù)切片法,計算血腫體積;4.利用Real-time PCR技術(shù)檢測炎癥因子m RNA水平;5.利用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測炎癥因子、趨化因子和NOX1的表達,以及炎性細胞的活化;6.利用TUNEL染色技術(shù)檢測細胞死亡情況;7.通過檢測MDA、H2O2、Cu Zn/Mn-SOD和ABTS活性,評價氧化應(yīng)激水平。研究結(jié)果1.NMN靜脈給藥可降低電凝法MCAO大鼠腦梗死體積。2.NMN預(yù)給藥或急性期給藥可降低線栓法MCAO小鼠腦梗死體積。3.NMN毒性測試顯示其無明顯的急性毒性。4.成功構(gòu)建了腦梗出血轉(zhuǎn)化模型。5.NMN靜脈給藥可減少腦梗后自發(fā)性出血轉(zhuǎn)化和t PA誘導(dǎo)的出血轉(zhuǎn)化。6.成功構(gòu)建了膠原酶誘導(dǎo)的腦出血模型(c ICH)。7.NMN急性期靜脈給藥可改善腦出血后小鼠神經(jīng)功能。8.NMN急性期靜脈給藥可緩解出血損傷誘導(dǎo)的腦組織水腫9.NMN急性期靜脈給藥可下調(diào)血腫及周圍組織炎癥因子(TNF-a、IL-6)和趨化因子(Icam-1)的表達。10.NMN急性期靜脈給藥可下調(diào)血腫及周圍組織小膠質(zhì)細胞的活化和中性粒細胞的浸潤。11.NMN急性期靜脈給藥可減少血腫周圍組織細胞死亡。12.NMN急性期靜脈給藥可降低血腫周圍組織脂質(zhì)氧化活性和過氧化氫活性,下調(diào)NOX1的表達。13.NMN長期給藥可促進腦出血模型小鼠神經(jīng)功能和體重的恢復(fù)。綜上所述,本課題成功構(gòu)建了腦梗出血轉(zhuǎn)化和腦出血模型,并發(fā)現(xiàn)了NMN在缺血性腦卒中模型、腦梗出血轉(zhuǎn)化模型和腦出血模型中的有益作用。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R743.3

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