本文關(guān)鍵詞：外周血單個(gè)核細(xì)胞對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)離斷吻合后修復(fù)與再生的影響

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【摘要】：目的:觀察外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)對(duì)SD大鼠坐骨神經(jīng)離斷傷端端吻合后神經(jīng)修復(fù)與再生的影響,并初步分析其作用機(jī)制。方法:SD大鼠60只隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、縫合組、PBMCs組和溶媒組。除空白對(duì)照組外均于梨狀肌下緣0.5 cm處銳性離斷左側(cè)坐骨神經(jīng),縫合組、PBMCs組和溶媒組隨即進(jìn)行神經(jīng)外膜吻合,PBMCs組端端吻合處給予細(xì)胞懸浮液0.2 m L約1×107個(gè)PBMCs,溶媒組給予等量的用于混懸PBMCs的溶媒。術(shù)后常規(guī)喂養(yǎng)4周,每周觀察大鼠左后肢的運(yùn)動(dòng)功能的大體恢復(fù)情況。4周后足趾分析法評(píng)定坐骨神經(jīng)損傷后的再生和/或功能的恢復(fù);電子天平精確稱量腓腸肌濕重,計(jì)算損傷側(cè)恢復(fù)率;HE染色觀察損傷側(cè)脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)變化;TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡并計(jì)數(shù);簡(jiǎn)化后的Masson染色和電鏡觀察神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)及超微結(jié)構(gòu);Western Bolt檢測(cè)脊髓和端端吻合處遠(yuǎn)端神經(jīng)組織中的BDNF、GDNF、CNTF、GAP-43、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)。結(jié)果:與對(duì)照組相比,模型組實(shí)驗(yàn)側(cè)后肢出現(xiàn)癱瘓、拖行、無(wú)展爪反射;腓腸肌萎縮嚴(yán)重,光鏡下可見(jiàn)肌纖維中有結(jié)締組織異常增生;脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元多呈空泡狀、核固縮、胞體變形且細(xì)胞凋亡陽(yáng)性表達(dá)數(shù)增多;遠(yuǎn)端神經(jīng)有瘢痕形成,光鏡下可觀察到神經(jīng)結(jié)構(gòu)完全喪失即Wallerian變性,電鏡下可見(jiàn)神經(jīng)束髓鞘板層松解、胞體扭曲等病理改變;實(shí)驗(yàn)側(cè)脊髓中BDNF、GDNF、CNTF的蛋白表達(dá)和Bcl-2/Bax的比值均下調(diào),GAP-43的蛋白表達(dá)增多;神經(jīng)組織中BDNF、CNTF的蛋白表達(dá)和Bcl-2/Bax的比值下調(diào),GDNF、GAP-43的蛋白表達(dá)增多。與模型組相比,PBMCs組實(shí)驗(yàn)側(cè)后肢運(yùn)動(dòng)功能有不同程度的恢復(fù),行走有力、足趾有自主展開(kāi)收縮;腓腸肌肌肉濕重增重,可見(jiàn)完整肌纖維;脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元形態(tài)完整近于對(duì)照組,TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)數(shù)減少;神經(jīng)端端吻合處無(wú)結(jié)締組織包繞,光鏡下可見(jiàn)神經(jīng)遠(yuǎn)端出現(xiàn)有髓神經(jīng)纖維,電鏡下脊髓前角神經(jīng)束髓鞘板層較緊實(shí)、形態(tài)近圓形。實(shí)驗(yàn)側(cè)脊髓和神經(jīng)組織中BDNF、GDNF、CNTF、GAP-43的蛋白表達(dá)和Bcl-2/Bax的比值均明顯上調(diào)。結(jié)論:PBMCs能夠促進(jìn)受損神經(jīng)再生及運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù),其機(jī)制可能為:(1)PBMCs刺激內(nèi)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子分泌,改善神經(jīng)微環(huán)境,促進(jìn)軸突生長(zhǎng)及髓鞘的形成;(2)PBMCs抑制凋亡相關(guān)因子的表達(dá),減少脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元凋亡。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R745

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