本文關(guān)鍵詞：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)部位異質(zhì)性與腫瘤侵襲性的關(guān)系

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【摘要】：目的探討表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)與C6膠質(zhì)細(xì)胞瘤侵襲的關(guān)系以及GBM侵襲性的部位差異。方法為了確定C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)水平對(duì)細(xì)胞侵襲及遷移能力的影響,應(yīng)用細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)培養(yǎng)基中添加表皮生長(zhǎng)因、使用吉非替尼阻斷表皮生長(zhǎng)因子受體與外源EGF結(jié)合以及對(duì)照組C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的體外侵襲性及遷移性,所得數(shù)據(jù)行單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用立體定向技術(shù),于SD大鼠右側(cè)尾狀核接種C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞系,構(gòu)建大鼠原位膠質(zhì)瘤模型。觀察大鼠接種后一般情況,體重變化,神經(jīng)功能評(píng)分(Bederson評(píng)分)。接種后第28天處死大鼠進(jìn)行灌注取腦制作組織切片,HE染色觀察大鼠膠質(zhì)瘤的細(xì)胞形態(tài)。確定C6膠質(zhì)母細(xì)胞瘤原位模型構(gòu)建是否成功。腫瘤及腦組織切片行波形蛋白(vimentin)、微管蛋白(tubulin)及表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)的免疫組織化學(xué)及免疫熒光染色,觀察此三種蛋白的表達(dá)位置,應(yīng)用Image-Proplus 6.0軟件對(duì)三種蛋白的免疫組化切片中腫瘤不同部位及正常腦組織進(jìn)行光密度值(optical density,OD)測(cè)量,并行單因素方差分析,比較每種蛋白不同區(qū)域的表達(dá)差異。結(jié)果在細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)中24小時(shí)后“EGF”組、“吉非替尼+EGF”組及空白組穿過基質(zhì)膠的C6細(xì)胞數(shù)分別為:74±7個(gè)、52±8個(gè)、30±8個(gè)。數(shù)據(jù)經(jīng)單因素方差分析,兩兩比較,其P值均0.001,三組各自穿過基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)共同比較,F=73.59,P0.001,存在顯著差異。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)中,24小時(shí)“EGF”組、“吉非替尼+EGF”組及空白組的細(xì)胞遷移的距離分別為:5093.33±1662.24mm、1310.00±570.00mm及1623.33±515.01mm。36小時(shí)“EGF”組、“吉非替尼+EGF”組及空白組的細(xì)胞遷移的距離分別為:12966.67±2365.51mm、2340.00±841.49mm及4300±840.18mm。兩時(shí)間點(diǎn)遷移距離經(jīng)單因素方差分析,F值分別為11.83及41.06,P值均0.05。除空白組與“吉非替尼+EGF”組比較,兩時(shí)間點(diǎn)的P0.05,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外,其余兩兩比較P均0.05。說明加入外源EGF,激動(dòng)細(xì)胞表面EGFR后,C6細(xì)胞侵襲和遷移能力得到了明顯提高,而阻斷激動(dòng)后可抑制C6細(xì)胞的侵襲和遷移能力。大鼠接種術(shù)后,假手術(shù)組大鼠一般狀況較前無明顯改變,Bederson評(píng)分0分。接種組大鼠于實(shí)驗(yàn)終止時(shí)體重較術(shù)前明顯減輕,實(shí)驗(yàn)終止時(shí)大鼠Bederson評(píng)分均為3分。大鼠腦組織大體標(biāo)本可見腫瘤呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng),腫瘤中心可見出血壞死。HE染色鏡下可見膠質(zhì)瘤細(xì)胞長(zhǎng)梭形緊密排列,瘤的外周部分區(qū)域可見典型的柵欄樣壞死區(qū)域。證實(shí)大鼠原位膠質(zhì)母細(xì)胞瘤模型構(gòu)建成功。波形蛋白免疫組化染色,可見其呈棕黃色表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的胞漿內(nèi)。腫瘤實(shí)質(zhì)部位的光密度值為8711.33±3138.35,腫瘤邊界光密度為3952.63±1525.29,正常腦組織內(nèi)的光密度值則為1257.94±960.39。兩兩比較,其P值均0.001,三區(qū)域的光密度值共同比較,F=48.93,P0.001,存在顯著差異。波形蛋白表達(dá)強(qiáng)度由正常腦組織、腫瘤邊緣到腫瘤實(shí)質(zhì)部位依次增高。微管蛋白免疫組化染色可見其于正常腦組織細(xì)胞胞漿內(nèi)均勻表達(dá)。腫瘤實(shí)質(zhì)部位的光密度值為223.44±57.69,腫瘤邊緣光密度值為3280.82±1447.74,正常腦組織內(nèi)的光密度值則為10808.52±6389.99,兩兩比較,P值均0.05。三區(qū)域的光密度值共同比較,F=31.04,P0.001,存在顯著差異。微管蛋白表達(dá)強(qiáng)度由正常腦組織、腫瘤邊緣到腫瘤實(shí)質(zhì)部位依次減低。免疫熒光檢測(cè)可發(fā)現(xiàn),波形蛋白表達(dá)于腫瘤組織上,微管蛋白則表達(dá)于正常的腦組織,腫瘤邊緣同時(shí)存在兩種蛋白的表達(dá)。綜上所述,應(yīng)用波形蛋白和微管蛋白可以很好的標(biāo)記腫瘤組織及正常腦組織。表皮生長(zhǎng)因子受體組化切片中可見其呈褐黃色表達(dá)于細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi),該蛋白于正常腦組織內(nèi)、腫瘤組織邊界及腫瘤內(nèi)部均有不同程度表達(dá)。其于腫瘤實(shí)質(zhì)部位的光密度值為14123.09±9397.98,腫瘤邊界光密度值為22101.43±9705.92,正常腦組織內(nèi)的光密度值則為7122.46±5294.36,經(jīng)兩兩比較,P值均0.05,三區(qū)域的光密度值共同比較,F=12.01,P0.001,存在顯著差異。因此表皮生長(zhǎng)因子受體在腫瘤內(nèi)部表達(dá)稍高,腫瘤邊緣表達(dá)強(qiáng)度最高,正常組織中最弱。表皮生長(zhǎng)因子受體與波形蛋白的免疫熒光染色示EGFR于腫瘤組織高表達(dá),并且其部分表達(dá)區(qū)域與波形蛋白的表達(dá)區(qū)域重合,位于腫瘤邊界。結(jié)論EGFR促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞C6的侵襲及遷移,瘤體中EGFR高表達(dá)于腫瘤邊界,高于周圍腦組織甚至高于瘤體內(nèi)部。提示EGFR促進(jìn)GBM侵襲的功能可能存在部位優(yōu)勢(shì),其表達(dá)于腫瘤高侵襲性的部位。本研究促進(jìn)了對(duì)GBM生物學(xué)特性的理解,為開發(fā)新的膠質(zhì)瘤的診療方案提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 異質(zhì)性 表皮生長(zhǎng)因子 波形蛋白 微管蛋白
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-13
• 第1章 實(shí)驗(yàn)研究13-42
• 1.1 材料與方法13-22
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法15-21
• 1.1.3 結(jié)果判定方法21-22
• 1.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法22
• 1.2 結(jié)果22-33
• 1.2.1 大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的培養(yǎng)22
• 1.2.2 EGFR表達(dá)情況對(duì)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲性的影響22-23
• 1.2.3 EGFR表達(dá)情況對(duì)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移能力的影響23-25
• 1.2.4 大鼠造模后一般生存狀況及體重改變25-27
• 1.2.5 正常對(duì)照組與接種組標(biāo)本的肉眼觀察及接種組HE染色鏡下組織形態(tài)學(xué)觀察27-28
• 1.2.6 大鼠腦組織切片中Vimentin、Tubulin及EGFR表達(dá)的免疫組織化學(xué)及免疫熒光染色檢測(cè)28-33
• 1.3 討論33-37
• 1.4 小結(jié)37
• 參考文獻(xiàn)37-42
• 第2章 綜述 膠質(zhì)瘤的相關(guān)分子標(biāo)志物和異質(zhì)性的研究進(jìn)展42-54
• 2.1 膠質(zhì)瘤的異質(zhì)性42-43
• 2.2 膠質(zhì)瘤的分子標(biāo)記物43-48
• 2.2.1 異檸檬酸脫氫酶（IDH）突變43-44
• 2.2.2 染色體 1p/19q44-45
• 2.2.3 表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）突變45-46
• 2.2.4 O6-甲基鳥嘌呤-DNA-甲基轉(zhuǎn)移酶（MGMT）啟動(dòng)子甲基化46
• 2.2.5 人端粒逆轉(zhuǎn)錄酶（h TERT）啟動(dòng)子突變46-47
• 2.2.6 ATRX突變47
• 2.2.7 P53突變47-48
• 2.2.8 其他分子標(biāo)記物48
• 2.3 未來與挑戰(zhàn)48-49
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 結(jié)論54-55
• 致謝55-56
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介56-57
• 作者簡(jiǎn)介57-58
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集58

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本文編號(hào)：1120093