發(fā)布時間：2017-10-26 15:02

  本文關(guān)鍵詞：血清饑餓下神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞對TRAIL耐受性變化的效應研究

  更多相關(guān)文章： 神經(jīng)膠質(zhì)瘤 血清饑餓 TRAIL死亡受體 假受體

【摘要】：本文對血清饑餓下神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞對TRAIL耐受性改變的效應進行了初步研究，實驗中選取的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞U251和神經(jīng)膠質(zhì)母瘤細胞U87，前者在正常培養(yǎng)下對TRAIL敏感，后者則不敏感。但是經(jīng)過血清饑餓處理后，U251細胞的敏感性降低，而U87細胞的敏感性增加。為了研究其變化的機制，我們檢測了兩種細胞在正常培養(yǎng)、單純TRAIL處理、血清饑餓、血清饑餓與TRAIL聯(lián)合作用下的TRAIL受體在轉(zhuǎn)錄水平、蛋白水平和啟動子活性的變化。結(jié)果表明：U251細胞株在正常培養(yǎng)下只高表達死亡受體DR5，這解釋了U251細胞對TRAIL非常敏感的原因，但經(jīng)過血清饑餓后，死亡受體DR5在表達水平下降，這初步解釋了U251細胞經(jīng)血清饑餓后對TRAIL耐受性增加的原因；而對于U87細胞，在高表達死亡受體DR5的同時，其假受體DcR2的表達也具有較高的表達水平，由此推測假受體DcR2的高表達是U87細胞對TRAIL不敏感的重要原因，同時經(jīng)過血清饑餓后，假受體DcR2在轉(zhuǎn)錄水平和表達水平都有了顯著性的降低，，通過對其啟動子活性的測定，我們也進一步證實了其DcR2水平的降低很可能是外界刺激導致的啟動子活性降低，從而減少了mRNA的轉(zhuǎn)錄，進而使蛋白表達下降，最終導致經(jīng)血清饑餓后的U87細胞對TRAIL的敏感性大大增加。除了對TRAIL受體變化的關(guān)注，我們還檢測了血清饑餓后凋亡相關(guān)蛋白的變化，并發(fā)現(xiàn)p53野生型的U87細胞在饑餓與TRAIL聯(lián)合處理下Bid切割不明顯而促凋亡蛋白Bax有明顯的升高，p53突變型的U251細胞Bid切割明顯且在饑餓后有所上升，這可能提示了兩種細胞內(nèi)源凋亡途徑激活的機制可能不盡相同。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)膠質(zhì)瘤 血清饑餓 TRAIL死亡受體 假受體
【學位授予單位】：北京理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-7
• 目錄7-10
• 第一章 緒論10-20
• 1.1 本論文研究的目的和意義10
• 1.2 神經(jīng)膠質(zhì)瘤概述10-13
• 1.2.1 神經(jīng)膠質(zhì)瘤的遺傳學基礎11-12
• 1.2.2 神經(jīng)膠質(zhì)瘤的生物學基礎12-13
• 1.3 神經(jīng)膠質(zhì)瘤的治療策略13-15
• 1.3.1 傳統(tǒng)的腫瘤治療方式13
• 1.3.2 腫瘤的生物治療13-14
• 1.3.3 腫瘤的抗血管生成治療14-15
• 1.4 細胞凋亡途徑及凋亡相關(guān)蛋白15-17
• 1.4.1 細胞凋亡15
• 1.4.2 細胞凋亡的途徑15-16
• 1.4.3 腫瘤與細胞凋亡16
• 1.4.4 促凋亡蛋白與凋亡抑制蛋白分析16-17
• 1.5 TRAIL 及其受體誘導凋亡的機制17-18
• 1.5.1 TRAIL 及其受體17
• 1.5.2 DR5 介導的細胞凋亡通路17-18
• 1.5.3 TRAIL 假受體在拮抗凋亡中的作用18
• 1.6 血清饑餓對細胞造成的生物學效應18-19
• 1.7 課題思路與技術(shù)路線19-20
• 第二章 材料與方法20-31
• 2.1 細胞培養(yǎng)與饑餓處理20
• 2.2 細胞增殖檢測（MTS）20
• 2.4 RNA 提取與逆轉(zhuǎn)錄20-22
• 2.5 DNA 聚合酶鏈式反應（PCR）22-24
• 2.5.1 PCR 擴增模板獲得22-23
• 2.5.2 實時熒光定量 PCR23-24
• 2.6 重組質(zhì)粒的構(gòu)建24-26
• 2.6.1 DcR1 和 DcR2 啟動子段的獲得24
• 2.6.2 限制性酶切24
• 2.6.3 酶切產(chǎn)物純化回收24-25
• 2.6.4 連接與轉(zhuǎn)化25
• 2.6.5 質(zhì)粒的小量提取與酶切鑒定25-26
• 2.6.6 測序26
• 2.7 免疫印跡（Western-blot）26-29
• 2.7.1 蛋白制備26-27
• 2.7.2 SDS-PAGE27-28
• 2.7.3 轉(zhuǎn)膜28
• 2.7.4 顯影28
• 2.7.5 二次免疫印跡28-29
• 2.8 流式細胞術(shù)測定細胞膜表面受體蛋白29
• 2.9 細胞轉(zhuǎn)染29
• 2.10 啟動子雙熒光素酶檢測29-30
• 2.11 統(tǒng)計學分析30-31
• 第三章 實驗結(jié)果31-45
• 3.1 血清饑餓下神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞對 TRAIL 耐受性的變化31-33
• 3.1.1 TRAIL 對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞半數(shù)致死濃度的確定31-32
• 3.1.2 血清饑餓時間的選擇32
• 3.1.3 血清饑餓后神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞對 TRAIL 耐受性的變化32-33
• 3.2 TRAIL 相關(guān)受體在不同處理下的變化33-39
• 3.2.1 不同處理下細胞內(nèi) DR4、DR5、DcR1、DcR2 在 mRNA 水平的變化33-36
• 3.2.2 不同處理下 DR5、DcR1 和 DcR2 受體在蛋白水平的變化36-39
• 3.3 啟動子的構(gòu)建及對外界刺激的應答39-43
• 3.3.1 啟動子的構(gòu)建39-42
• 3.3.2 細胞轉(zhuǎn)染效率的測定42
• 3.3.3 啟動子對外界刺激的應答42-43
• 3.4 不同處理下抑凋亡蛋白與促凋亡蛋白水平的變化43-45
• 第四章 討論45-47
• 4.1 TRAIL 用于腫瘤治療的可能性和廣譜性45
• 4.2 缺血狀態(tài)下 TRAIL 使用的選擇性討論45-46
• 4.3 血清饑餓模型的問題及腫瘤治療以外的啟示46-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-53
• 附錄53-56
• 攻讀學位期間發(fā)表論文與研究成果清單56-57
• 致謝57

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 方福德;腫瘤饑餓療法(starving tumor therapy)[J];癌癥進展;2004年05期

2 Fiona C. KIMBERLEY,Gavin R. SCREATON;Following a TRAIL: Update on a ligand and its five receptors[J];Cell Research;2004年05期

3 王茂明;楊福兵;;腦膠質(zhì)瘤的治療現(xiàn)狀[J];醫(yī)學綜述;2012年21期

本文編號：1099176