發(fā)布時(shí)間：2017-10-26 14:14

  本文關(guān)鍵詞：新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后松果體中microRNA表達(dá)譜變化及miR-375對松果體功能的影響

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【摘要】：目的:通過制作新生大鼠缺氧缺血性腦損傷模型,檢測腦損傷后大鼠松果體中micro RNA的表達(dá)譜變化;并進(jìn)行松果體細(xì)胞培養(yǎng),建立細(xì)胞缺氧缺糖模型,用miR-375慢病毒載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞,檢測轉(zhuǎn)染效率及松果體功能的變化,探討miR-375在缺氧缺糖中對松果體功能的影響。方法:采用7日齡SD新生大鼠,根據(jù)改良Rice-Vannucci法建立HIBD模型。將新生大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham組)、缺氧缺血組(HIBD組),采用基因芯片及RT-qPCR法檢測HIBD后24 h大鼠松果體中micro RNA表達(dá)譜的變化;采用新生24h以內(nèi)的SD大鼠進(jìn)行松果體培養(yǎng),行氧糖剝奪(oxygen glucose deprivation,OGD)的處理方法,模擬缺氧缺血模型。選取氧糖剝奪后0 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h六個(gè)時(shí)間點(diǎn),RT-qPCR測定氧糖剝奪前后AANAT mRNA及miR-375表達(dá)的變化;ELISA法檢測褪黑素(MT)水平的變化;用CCK8法檢測細(xì)胞活性。采用miR-375慢病毒載體轉(zhuǎn)染后,行上述實(shí)驗(yàn),初步探討松果體中micro RNA在缺氧缺血性腦損傷中的可能機(jī)制。結(jié)果:1、芯片及RT-qPCR結(jié)果顯示,新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后松果體中micro RNA表達(dá)譜發(fā)生變化。2、RT-qPCR結(jié)果顯示,缺氧缺糖后miR-375表達(dá)上調(diào),24 h達(dá)到高峰后下降,72 h趨向0 h水平;AANAT表達(dá)下調(diào),12 h左右達(dá)最低點(diǎn),72 h趨向0 h水平;miR-375慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后miR-375表達(dá)明顯上調(diào),72 h趨于穩(wěn)定;AANAT表達(dá)下調(diào),48 h趨于穩(wěn)定;miR-375慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后行缺氧缺糖實(shí)驗(yàn),miR-375表達(dá)上調(diào),24 h達(dá)到高峰;AANAT表達(dá)下調(diào),24 h左右達(dá)最低點(diǎn)。3、ELISA結(jié)果發(fā)現(xiàn),缺氧缺糖后MT分泌水平下降,24 h左右達(dá)最低點(diǎn),96 h左右恢復(fù)缺氧缺糖0 h水平;miR-375慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后MT分泌水平下降,72 h趨于穩(wěn)定;miR-375慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后行缺氧缺糖實(shí)驗(yàn),MT分泌水平下降,24 h及48h之間達(dá)最低點(diǎn)。4、CCK8結(jié)果顯示,缺氧缺糖0.5 h、1 h后,細(xì)胞增長活力無明顯變化,缺氧缺糖2 h后,可使松果體細(xì)胞獲得適度損傷,缺氧缺糖3 h后,細(xì)胞活力明顯下降。結(jié)論:1.新生大鼠HIBD后松果體micro RNA表達(dá)譜發(fā)生改變,其中miR-375明顯上調(diào)。2.松果體細(xì)胞缺氧缺糖后miR-375、AANAT表達(dá),分泌MT水平均發(fā)生變化。3.松果體細(xì)胞缺氧缺糖損傷后,miR-375加重缺氧缺糖造成松果體功能的損害。4.松果體細(xì)胞會隨缺氧缺糖時(shí)間延長細(xì)胞活性下降。
【關(guān)鍵詞】：缺氧缺血 松果體 新生大鼠 細(xì)胞培養(yǎng) miR-375 慢病毒 AANAT MT
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R742
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-9
• 引言9-12
• 一、新生兒缺氧缺血性腦病的研究現(xiàn)狀9
• 二、缺氧缺血性腦損傷后松果體的參與及重要性9-10
• 三、MicroRNA的產(chǎn)生及作用10
• 四、松果體中micro RNA10-12
• 第一部分 新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后松果體中micro RNA表達(dá)譜變化12-27
• 前言12
• 材料與方法12-18
• 結(jié)果18-24
• 討論24-27
• 第二部分miR-375對松果體功能的影響27-44
• 前言27
• 材料與方法27-31
• 結(jié)果31-41
• 討論41-44
• 結(jié)論44-45
• 實(shí)驗(yàn)不足及展望45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 綜述50-61
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 英漢雙解縮略詞61-62
• 研究生期間發(fā)表及待發(fā)表文章62-63
• 本課題資助項(xiàng)目63-64
• 致謝64-65

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本文編號：1099009