本文關(guān)鍵詞：中腦多巴胺神經(jīng)元不同毀損大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白與褪黑素的相關(guān)性研究

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【摘要】：目的1.觀察不同病程PD大鼠DAT動態(tài)變化,并探討該變化與TH之間的關(guān)系。2.探討中腦多巴胺神經(jīng)元不同毀損大鼠紋狀體中DAT的密度及功能變化。3.探討中腦多巴胺神經(jīng)元不同毀損大鼠血清MLT的變化。4.研究中腦多巴胺神經(jīng)元不同毀損大鼠黑質(zhì)TH陽性細胞數(shù)與DAT相關(guān)性。5.研究中腦多巴胺神經(jīng)元不同毀損大鼠黑質(zhì)TH陽性細胞數(shù)與MLT相關(guān)性。6.探討中腦多巴胺神經(jīng)元不同毀損大鼠DAT與MLT的相關(guān)性。方法:1.采用雙點注射6-羥基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)至大鼠右側(cè)黑質(zhì)致密部(Substantia nigra pars compacta,SNc)和前腦內(nèi)側(cè)束(Medial forebrain bundle,MFB)建立偏側(cè)PD模型,或單點注射6-OHDA至右側(cè)MFB,通過控制不同的給藥劑量建立偏側(cè)不同毀損程度的中腦多巴胺神經(jīng)元大鼠模型。2.中腦多巴胺神經(jīng)元不同毀損大鼠的鑒定:阿撲嗎啡(Apomorphine,APO)誘導的旋轉(zhuǎn)行為的檢測,觀察不同6-OHDA劑量組大鼠的旋轉(zhuǎn)情況。通常將旋轉(zhuǎn)圈數(shù)210r/30min,視為成功的帕金森疾病(Parkinson’s disease,PD)模型。3.大鼠心臟活體采血:大鼠腹腔注射過量10%水合氯醛,深度麻醉后將其四肢固定,迅速打開胸腔,剝離心臟周圍結(jié)締組織,充分暴露心臟,剪開右心耳,迅速取血約4.5ml。室溫靜置30min,離心取血清,-20°C保存,同一批次測定MLT。4.建模后2W、4W、6W PD大鼠分別尾靜脈注射99m Tc-TRODAT-1,1h后取左右紋狀體,以γ計數(shù)儀測定放射性計數(shù),并計算單位質(zhì)量的左、右放射性計數(shù)率以及左、右紋狀體單位質(zhì)量的放射性計數(shù)比值。5.經(jīng)異氟烷氣體麻醉后的大鼠,尾靜脈注射99m Tc-TRODAT-1標記多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白(Dopamine transporter,DAT),運用小動物活體成像系統(tǒng)檢測紋狀體區(qū)域DAT的密度及功能變化。6.ELISA檢測血清褪黑素(Melatonin,MLT):采用ELISA檢測大鼠血清MLT水平,了解MLT與中腦多巴胺神經(jīng)元不同毀損大鼠旋轉(zhuǎn)圈數(shù)及DAT的關(guān)系。7.免疫組織化學檢測:取中腦黑質(zhì)制成石蠟塊,4mm連續(xù)切片,小鼠抗大鼠TH抗體,免疫組化染色,了解中腦黑質(zhì)DA能神經(jīng)元的變化及與DAT、MLT水平的關(guān)系。結(jié)果:1.不同病程PD大鼠毀損側(cè)紋狀體放射計數(shù)明顯低于健側(cè),建模后2W、4W、6W PD大鼠DAT相對放射計數(shù)較健側(cè)分別降低了16.8%、35.9%和50.1%(p0.05~0.001);不同病程PD大鼠毀損側(cè)紋狀體DAT的相對放射計數(shù)與TH陽性細胞數(shù)呈高度的正相關(guān)(p0.01,r=0.9,n=15)。2.6-OHDA注射2mg劑量組大鼠不旋轉(zhuǎn),僅出現(xiàn)行動遲緩、少動、豎毛、尾僵直等異常行為表現(xiàn);4mg劑量組大鼠2W、4W、6W、8W APO誘導的旋轉(zhuǎn)圈數(shù)均210r/30min;8mg劑量組大鼠2W、4W、6W、8W APO誘導的旋轉(zhuǎn)圈均210r/30min。4mg和8mg劑量組大鼠誘導的旋轉(zhuǎn)圈數(shù)均明顯高于正常對照組及假手術(shù)組,統(tǒng)計學上有顯著性差異(p0.001)。3.術(shù)后8W血清MLT水平:正常對照組的血清MLT水平為(44.67±1.10)pg/ml,假手術(shù)組(45.21±1.19)pg/ml,2mg劑量組(49.44±1.54)pg/ml,4mg劑量組(58.35±1.73)pg/ml,8mg劑量組(66.27±1.94)pg/ml。中腦多巴胺神經(jīng)元不同毀損大鼠血清MLT濃度分別與正常對照組及假手術(shù)組比較,統(tǒng)計學上均有顯著性差異(p0.001)。4.6-OHDA注射2mg劑量組毀損(右)側(cè)中腦黑質(zhì)TH陽性神經(jīng)元為(66.25±13.68)較健(左)側(cè)(121.94±10.87)減少43.62%±15.6%;4mg劑量組毀損側(cè)為(26.38±3.08)較健側(cè)(116.19±17.11)減少59.9%±8.74%;8mg劑量組毀損側(cè)為(4.13±4.09)較健側(cè)(98.88±14.09)減少95.17%±4.64%。2mg、4mg和8mg劑量組毀損側(cè)與正常對照組及假手術(shù)組比較,差異均有顯著性意義(p0.001);8mg劑量組健側(cè)與正常對照組及假手術(shù)組比較,差異也有顯著性意義(p0.05);而假手術(shù)組毀損側(cè)和健側(cè)中腦黑質(zhì)TH免疫反應陽性神經(jīng)元與正常對照組左右兩側(cè)相比差異均無統(tǒng)計學意義(p0.05)。5.建模后8W紋狀體DAT放射性計數(shù)為:正常對照組左側(cè)紋狀體DAT放射性計數(shù)為(1569.23±295.38)bq/mm3、右側(cè)為(1498.57±275.73)bq/mm3;2mg劑量組健(左)側(cè)(1258.97±181.96)bq/mm3、毀損(右)側(cè)(1174.73±65.94)bq/mm3;4mg劑量組健側(cè)(1033.45±116.66)bq/mm3、毀損側(cè)(943.32±47.63)bq/mm3;8mg劑量組健側(cè)(994.15±248.86)bq/mm3、毀損側(cè)(679.84±131.79)bq/mm3。2mg、4mg和8mg劑量組毀損側(cè)與正常對照組同側(cè)比較,差異均有顯著性意義(p0.05)。2mg、4mg和8mg劑量組健側(cè)與正常對照組同側(cè)比較,差異也均有顯著性意義(p0.05)。6.建模后8W中腦多巴胺神經(jīng)元不同毀損大鼠血清MLT濃度與毀損側(cè)紋狀體DAT平均放射性計數(shù)呈顯著的負相關(guān)性,|r|=0.873,(p0.01,n=16);MLT濃度與毀損側(cè)黑質(zhì)TH免疫陽性細胞數(shù)呈顯著的負相關(guān)性,|r|=0.94(p0.01,n=16);DAT與TH呈顯著的正相關(guān)性,|r|=0.863(p0.01,n=16)。結(jié)論:1.PD大鼠紋狀體DAT含量隨著病程的增加逐漸減少,99mTc-PRODAT-1的放射性分布能夠較準確的反映突觸前DA能神經(jīng)元的變化。2.中腦多巴胺神經(jīng)元不同毀損大鼠DAT水平與毀損程度呈反比,可能與PD的進展有關(guān)。3.中腦多巴胺神經(jīng)元不同毀損大鼠血清MLT水平隨毀損程度增加逐漸增高,可能與PD的進展有關(guān)。4.血清MLT水平與紋狀體DAT水平可能是臨床判斷PD病嚴重程度的一個潛在指標。
【關(guān)鍵詞】：帕金森病 褪黑素 多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白 酪氨酸羥化酶 6-羥基多巴胺 阿撲嗎啡
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R742.5
【目錄】：

• 主要英文縮略詞4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-22
• 結(jié)果22-32
• 討論32-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻38-42
• 致謝42-43
• 綜述43-51
• 參考文獻48-51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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本文編號：1053480