本文關(guān)鍵詞：自噬在低氧促神經(jīng)干細(xì)胞增殖及在腦缺血損傷中的調(diào)節(jié)作用

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【摘要】：神經(jīng)干細(xì)胞(Neural Stem Cell,NSC)是指具有分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元和少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力,能自我更新并能生成大量腦組織細(xì)胞的細(xì)胞群。在胚胎期,神經(jīng)干細(xì)胞主要分布在大腦的皮層、海馬、紋狀體和中腦等區(qū)域;在成年期,神經(jīng)干細(xì)胞主要局限在海馬齒狀回SGZ、環(huán)繞側(cè)腦室的室腦膜下層SVZ和紋狀體。神經(jīng)干細(xì)胞因其具有自我更新能力和分化能力,通過移植神經(jīng)干細(xì)胞給治療神經(jīng)退行性疾病帶來了新的希望,因而對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖和分化的研究是最近幾年的熱點(diǎn)。神經(jīng)干細(xì)胞的增殖受到多方面因素的影響和調(diào)節(jié),其中內(nèi)因主要有基因、神經(jīng)干細(xì)胞內(nèi)蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等,外因則包括神經(jīng)干細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)因素、細(xì)胞間相互作用、各種理化因素如低氧等。在哺乳動(dòng)物中由于腦部區(qū)域的特殊構(gòu)造,通常情況下在胚胎發(fā)育階段和成年腦組織中氧含量只有3%-5%,稱之為“生理性低氧”。因此,研究生理性低氧情況下神經(jīng)干細(xì)胞的增殖情況具有重要的生理意義。本實(shí)驗(yàn)即在生理性低氧條件下開展對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖特性的研究,從細(xì)胞代謝的角度闡釋低氧對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的調(diào)控作用。自噬(autophagy)是溶酶體介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和細(xì)胞器降解的正常新陳代謝過程,在維持細(xì)胞自身內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,保護(hù)細(xì)胞免受應(yīng)激損傷等方面發(fā)揮著重要作用。在各種應(yīng)激狀態(tài)下,自噬被激活,可以清除細(xì)胞內(nèi)異常折疊的蛋白質(zhì)和衰老、受損的細(xì)胞器,促進(jìn)細(xì)胞的存活,但如果細(xì)胞自噬被過度激活,細(xì)胞自噬壓力超出細(xì)胞自身可調(diào)節(jié)的程度,也會(huì)加速細(xì)胞的死亡。在神經(jīng)干細(xì)胞的低氧過程中自噬會(huì)起到什么作用還不得而知。Wip1(Wild type p53-induced phosphatase 1)是一種原癌基因,屬于絲氨酸/蘇氨酸家族成員的磷酸酶,因此關(guān)于Wip1的研究主要集中在識(shí)別Wipl的靶蛋白與去磷酸化位點(diǎn)上。到目前為止已經(jīng)發(fā)現(xiàn)至少7種Wipl靶蛋白,包括與細(xì)胞增殖周期密切相關(guān)的p53、p38等,Wip1通過使p53、p38發(fā)生去磷酸化解除它們抑制細(xì)胞增殖的作用,從而在細(xì)胞增殖過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。那么,在神經(jīng)干細(xì)胞低氧過程中Wip1是否參與對(duì)細(xì)胞增殖的調(diào)控?該調(diào)控作用是否與自噬調(diào)節(jié)相關(guān)?本文將就這些問題分別進(jìn)行討論。在本研究中,我們采用3%O2低氧模型(以20%O2為常氧對(duì)照)首先探討了低氧條件下神經(jīng)干細(xì)胞中自噬的變化,及其對(duì)細(xì)胞存活的影響;然后檢測(cè)了Wip1在低氧過程中的表達(dá)變化及其對(duì)細(xì)胞存活和自噬的影響,并進(jìn)一步分析了Wip1與自噬在低氧條件下調(diào)節(jié)神經(jīng)干細(xì)胞增殖時(shí)的關(guān)聯(lián)。研究結(jié)果如下:1.低氧對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞活性的影響我們采用常氧(20%)和低氧(3%)對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行不同時(shí)間的處理,通過比較低氧和常氧對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的存活和增殖的影響,以及不同氧濃度條件下神經(jīng)干細(xì)胞中活性氧ROS的變化,探究低氧對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞活性的影響。1.1神經(jīng)干細(xì)胞分離和培養(yǎng)取SD大鼠14.5天胚胎的中腦,接種于含有EGF,b FGF等因子的無血清培養(yǎng)基中,原代細(xì)胞經(jīng)過一天的培養(yǎng)就可以觀察到神經(jīng)干細(xì)胞的增殖現(xiàn)象,神經(jīng)干細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)液中,2到3天可以觀察到神經(jīng)干細(xì)胞形成神經(jīng)球,懸浮生長(zhǎng)5天左右可以經(jīng)消化傳代。1.2神經(jīng)干細(xì)胞的鑒定為了證明我們所分離培養(yǎng)的細(xì)胞是神經(jīng)干細(xì)胞,我們?nèi)∩L(zhǎng)狀態(tài)良好、大小合適的神經(jīng)球,進(jìn)行Nestin染色鑒定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,神經(jīng)干細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)成球狀,神經(jīng)球中絕大部分細(xì)胞顯示Nestin染色陽性,結(jié)果證實(shí)我們培養(yǎng)的細(xì)胞確實(shí)為神經(jīng)干細(xì)胞,且細(xì)胞純度較高,可以進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。1.3低氧對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞存活的影響我們用CCK-8實(shí)驗(yàn)比較不同氧濃度、不同低氧處理時(shí)間對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞存活能力的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)過3%低氧24 h、48 h、72 h處理后存活能力顯著提高,表明3%低氧能夠顯著促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的存活。1.4低氧對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響為了進(jìn)一步探究低氧對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響,我們通過Brd U和HPI(Hypoxyprobe?-1 Kit)低氧探針摻入法觀察了不同氧濃度下神經(jīng)干細(xì)胞的增殖狀態(tài)。結(jié)果顯示:神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)過3%低氧處理后Brd U陽性細(xì)胞較常氧組明顯增加,并且Brd U陽性細(xì)胞主要分布在神經(jīng)球的外圍,表明該部位是神經(jīng)干細(xì)胞增殖的主要區(qū)域。1.5低氧對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞中ROS含量的影響低氧與ROS聯(lián)系密切,正常含量的ROS可作為第二信使影響細(xì)胞周期,過量的ROS將會(huì)造成細(xì)胞損傷。我們進(jìn)一步應(yīng)用ROS熒光分子探針孵育神經(jīng)干細(xì)胞,經(jīng)過染色后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析。結(jié)果顯示:與常氧對(duì)照組相比,神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)過3%低氧處理不同時(shí)間點(diǎn)后ROS都明顯升高,48 h時(shí)增加最為顯著,其含量增加了約2.5倍,低氧72 h ROS含量降低,但仍明顯高于常氧對(duì)照組。1.6自噬(線粒體自噬)抑制劑Mdivi-1對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞中ROS含量的影響ROS主要是在線粒體中產(chǎn)生,線粒體自噬作為自噬的一種類型,我們又進(jìn)一步檢測(cè)了線粒體自噬抑制劑Mdivi-1處理神經(jīng)干細(xì)胞24 h后神經(jīng)干細(xì)胞中的ROS含量,結(jié)果顯示:與常氧對(duì)照組相比,低氧組和常氧給藥組ROS含量增加明顯;與低氧組相比,低氧給藥組ROS水平明顯升高,以上結(jié)果提示3%低氧下ROS含量適度增加,抑制自噬(線粒體自噬)后神經(jīng)干細(xì)胞中的ROS水平明顯升高,且低氧下增加更多。2.低氧對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞自噬的影響自噬是細(xì)胞的一種代謝機(jī)制,當(dāng)細(xì)胞中ROS水平過高時(shí)會(huì)激發(fā)自噬來保護(hù)細(xì)胞免受過量ROS帶來的傷害。為闡明低氧下神經(jīng)干細(xì)胞的自噬水平及其與ROS和細(xì)胞存活的關(guān)系,我們分別進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn):2.1低氧條件下神經(jīng)干細(xì)胞自噬水平的變化將神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行3%低氧處理,在不同時(shí)間點(diǎn)應(yīng)用Western Blot、免疫熒光等方法觀察其自噬情況。結(jié)果顯示:和常氧對(duì)照組相比,經(jīng)過3%低氧處理后神經(jīng)干細(xì)胞的自噬水平顯著增加。2.2抑制自噬阻礙神經(jīng)干細(xì)胞的增殖為了進(jìn)一步驗(yàn)證自噬對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞存活的影響,我們應(yīng)用自噬抑制劑3-MA處理神經(jīng)干細(xì)胞,不同時(shí)間點(diǎn)后對(duì)其進(jìn)行CCK-8檢測(cè)。結(jié)果顯示:抑制自噬后無論是低氧還是常氧條件下神經(jīng)干細(xì)胞的存活能力均降低,在低氧下降低尤其顯著,這提示自噬對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖有顯著影響。3.低氧條件下神經(jīng)干細(xì)胞中Wip1的表達(dá)變化及其在細(xì)胞增殖中的作用Wip1作為與細(xì)胞增殖周期蛋白密切相關(guān)的磷酸酶,在細(xì)胞增殖過程中發(fā)揮著重要作用。為了探究低氧條件下Wip1對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)作用,我們進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn):3.1低氧條件下神經(jīng)干細(xì)胞中Wip1的表達(dá)變化我們首先檢測(cè)了不同氧濃度不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)干細(xì)胞中Wip1的表達(dá)情況。結(jié)果顯示:在常氧條件下,Wip1在神經(jīng)干細(xì)胞中有少量的基礎(chǔ)性表達(dá);在3%低氧處理后Wip1的表達(dá)量明顯升高。我們進(jìn)一步應(yīng)用real-time PCR技術(shù)檢測(cè)不同氧濃度不同時(shí)間點(diǎn)處理神經(jīng)干細(xì)胞后Wip1的m RNA水平,發(fā)現(xiàn)低氧處理24 h和72 h,與常氧對(duì)照相比,低氧組的Wip1 m RNA無明顯改變,低氧48 h其m RNA水平明顯低于常氧組,這些數(shù)據(jù)提示W(wǎng)ip1的轉(zhuǎn)錄活性并沒有貢獻(xiàn)低氧下Wip1蛋白水平的增加。1.6自噬(線粒體自噬)抑制劑Mdivi-1對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞中ROS含量的影響3.2敲低Wip1后觀察神經(jīng)干細(xì)胞的存活情況為了進(jìn)一步探究在低氧下Wip1對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的作用,我們應(yīng)用si RNA技術(shù)敲低Wip1的表達(dá),在低氧不同時(shí)間觀察其對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞存活能力的影響。結(jié)果顯示:用si RNA敲低Wip1表達(dá),常氧和低氧下神經(jīng)干細(xì)胞的存活能力都有所降低。3.3敲除Wip1后觀察神經(jīng)干細(xì)胞的存活情況進(jìn)一步用Wip-/-小鼠來源的神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)低氧處理不同時(shí)間后同樣發(fā)現(xiàn)低氧組與常氧組相比神經(jīng)干細(xì)胞的存活率明顯下降,且隨時(shí)間增加更為顯著,提示W(wǎng)ip1在低氧促神經(jīng)干細(xì)胞增殖的過程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。3.4敲低Wip1后對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞自噬活性的影響通過上述研究我們發(fā)現(xiàn),自噬和Wip1都參與低氧下對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的調(diào)控,但是二者在調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞增殖中的相互作用尚不清楚。為探明在低氧過程中Wip1與自噬的關(guān)系,我們先用Wip1 si RNA轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細(xì)胞,然后以Western Blot檢測(cè)si RNA干預(yù)Wip1后對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞自噬活性的影響。結(jié)果顯示:應(yīng)用Wip1 si RNA后低氧對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞自噬的激活作用受到抑制,常氧組未發(fā)現(xiàn)明顯變化。綜上所述,本研究證實(shí)了在低氧(3%)條件下神經(jīng)干細(xì)胞的增殖能力增強(qiáng),自噬水平隨低氧時(shí)間增加而升高,同時(shí)發(fā)現(xiàn)在該低氧條件下神經(jīng)干細(xì)胞中Wip1的表達(dá)水平升高,并初步闡明Wip1在調(diào)節(jié)神經(jīng)干細(xì)胞增殖和促進(jìn)自噬方面發(fā)揮重要作用。總之,本研究首次發(fā)現(xiàn)了低氧條件下在神經(jīng)干細(xì)胞增殖過程中自噬和Wip1可能存在關(guān)聯(lián),這為探索低氧促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的分子機(jī)制提供了新的思路。我們將在以后的研究中更深入地探討自噬和Wip1在介導(dǎo)低氧促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖過程中的相互作用。腦卒中是一類嚴(yán)重危害人類健康的疾病,已經(jīng)逐漸成為威脅人類生命的主要?dú)⑹帧Ｎ覈鳛槭澜缟先丝谧疃嗟膰?隨著人民生活水平的提高,我國的老年人數(shù)量在顯著增加,與之而來的一些與年齡有關(guān)的疾病發(fā)病率也逐年增加,腦卒中作為其中的一種給患者本人及其家庭帶來了的嚴(yán)重的負(fù)面影響。在腦卒中中其最主要類型是缺血性腦卒,缺血性腦卒中主要是由大腦動(dòng)脈栓塞造成局部供血不足引起,可對(duì)腦組織造成嚴(yán)重?fù)p傷。由于缺血性腦卒中發(fā)病急促、治療的時(shí)間窗短,危害嚴(yán)重,只有少數(shù)患者能夠得到及時(shí)的治療,因此進(jìn)一步探究缺血性腦卒中的病理生理過程,為進(jìn)一步的防治提供參考就顯得尤為重要。自噬(autophagy)是一種細(xì)胞自身古老的自我保護(hù)機(jī)制,線粒體自噬作為其中的特殊類型,近年來成為研究的熱點(diǎn)。線粒體自噬(mitophagy)是指在ROS(Reactive Oxygen Species,ROS)、營(yíng)養(yǎng)缺乏、缺血/缺氧、細(xì)胞衰老等外界刺激的作用下,線粒體發(fā)生損傷或老化,受損線粒體被特異性識(shí)別包裹進(jìn)自噬體中并進(jìn)一步與溶酶體融合,從而將受損線粒體降解的過程,其概念由Lemasters等人在2005年首次提出,其最基本內(nèi)容是:線粒體被自噬體包裹并運(yùn)送至溶酶體進(jìn)行分解代謝的過程。線粒體自噬活動(dòng)受到多種分子蛋白的調(diào)節(jié),而BNIP3作為其中的一種,其作用越來越受到關(guān)注。BNIP3(Bc1-2/adenovirus E1B 19 k D protein interacting protein 3)隸屬于Bcl-2蛋白超家族,可與腺病毒轉(zhuǎn)錄基因E1B編碼的E1B19k D蛋白或Bcl-2蛋白相互作用,在體內(nèi)主要定位于線粒體外膜,BNIP3啟動(dòng)子區(qū)因含有結(jié)合HIF-1(HypoxiaInducible Factor 1,HIF-1)的低氧反應(yīng)元件HRE,所以也是HIF-1的靶基因。在發(fā)生腦卒中時(shí),機(jī)體發(fā)生缺血缺氧,此時(shí)HIF-1能夠作用于BNIP3,使其表達(dá)水平上調(diào)。BNIP3的功能研究主要集中于兩個(gè)方面:一方面BNIP3可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡或者壞死,起促進(jìn)死亡的作用,另一方面BNIP3可以引起線粒體自噬,進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞存活�，F(xiàn)在的研究熱點(diǎn)越來越傾向于聚焦BNIP3的促存活作用。本研究采用大鼠永久性大腦中動(dòng)脈閉塞模型(permanent Middle Cerebral Artery Occlusion,p MCAO),在MCAO處理不同時(shí)間后,觀察BNIP3、線粒體自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)變化,分析腦缺血損傷程度與BNIP3表達(dá)水平之間的關(guān)系,探討線粒體自噬和BNIP3在缺血性腦卒中發(fā)病過程中的可能作用。本研究發(fā)現(xiàn)在腦缺血早期線粒體自噬被激活,缺血晚期線粒體自噬被抑制而導(dǎo)致腦損傷加重,在此過程中BNIP3可能發(fā)揮重要的調(diào)控作用。主要研究結(jié)果如下:1.腦缺血不同時(shí)間點(diǎn)大鼠腦梗死體積的變化1.1大鼠腦組織TTC染色為進(jìn)一步評(píng)價(jià)大鼠p MCAO后的腦損傷情況,我們對(duì)p MCAO不同時(shí)間點(diǎn)處理的大鼠腦組織進(jìn)行切片,用TTC染色來確定腦損傷程度。發(fā)現(xiàn)0 h(sham)組大鼠無腦梗死發(fā)生,其余各組均存在腦梗死區(qū),且隨缺血時(shí)間(3 h、9 h、24 h)大鼠腦梗死體積逐漸增加,24 h組腦梗死體積到50%以上。2.線粒體形態(tài)在腦缺血過程中的改變2.1 p MCAO后不同時(shí)間點(diǎn)線粒體自噬自噬體的變化用透射電鏡觀察p MCAO后不同時(shí)間點(diǎn)的線粒體自噬自噬體的形態(tài)和結(jié)構(gòu),0 h(sham)大鼠腦組織中神經(jīng)細(xì)胞的線粒體結(jié)構(gòu)正常,缺血3 h和9 h線粒體多變圓,并可見典型的線粒體自噬情況,線粒體被溶酶體包裹,形成具有雙層膜的自噬溶酶體結(jié)構(gòu);缺血24 h線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)受到嚴(yán)重破壞:雙層膜結(jié)構(gòu)不完整,嵴消失,線粒體腫脹明顯加劇,且多呈空泡化,完全觀察不到線粒體自噬結(jié)構(gòu)。3.BNIP3和線粒體自噬相關(guān)蛋白在腦缺血中的表達(dá)變化3.1 p MCAO后不同時(shí)間點(diǎn)BNIP3表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化為檢測(cè)p MCAO后不同時(shí)間點(diǎn)BNIP3的變化情況,我們收集p MCAO后不同時(shí)間點(diǎn)的腦組織進(jìn)行Western Blot實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,當(dāng)p MCAO處理3 h和9 h時(shí)BNIP3蛋白表達(dá)水平升高,而p MCAO處理24 h時(shí)BNIP3表達(dá)水平下調(diào),這提示BNIP3在p MCAO后不同時(shí)間點(diǎn)有先升后降的特點(diǎn),其可能在腦缺血早期發(fā)揮作用。3.2 p MCAO后不同時(shí)間點(diǎn)線粒體自噬相關(guān)蛋白的變化我們又進(jìn)一步檢測(cè)了p MCAO后不同時(shí)間點(diǎn)線粒體自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)變化,結(jié)果顯示,當(dāng)p MCAO處理3 h和9 h時(shí)自噬上游調(diào)控分子Beclin-1表達(dá)增加,自噬標(biāo)記分子LC3-II/I比值升高,接頭蛋白P62和線粒體標(biāo)記蛋白TOM20、HSP60水平下降,提示線粒體自噬被激活;但是,隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng)這些蛋白表達(dá)發(fā)生了明顯改變,腦缺血24 h時(shí)Beclin-1表達(dá)下調(diào),LC3-II/I比值降低,而P62和TOM20、HSP60水平增加。以上結(jié)果提示,在腦缺血早期線粒體自噬被激活,而在腦缺血晚期線粒體自噬受到抑制。綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)在腦缺血過程中線粒體自噬以及BNIP3的表達(dá)變化與腦缺血損傷程度密切相關(guān):線粒體自噬在腦缺血早期被激活,而在腦缺血晚期受到抑制;BNIP3高表達(dá)有利于減輕缺血性腦損傷,BNIP3低表達(dá)可能會(huì)加重其損傷程度。該結(jié)果為今后研究BNIP3的潛在的腦保護(hù)作用提供了直接證據(jù),同時(shí)也為臨床治療缺血性腦損傷疾病提供了新的干預(yù)靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)干細(xì)胞 自噬 Wip1 低氧 線粒體自噬 腦缺血 BNIP3 p MCAO
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 第一部分 低氧促神經(jīng)干細(xì)胞增殖中自噬的調(diào)節(jié)作用6-49
• 縮寫詞表6-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-17
• 前言17-20
• 材料與方法20-30
• 一 實(shí)驗(yàn)材料和試劑20-23
• 二 實(shí)驗(yàn)方法23-30
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-42
• 1. 低氧對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞活性的影響30-35
• 1.1 神經(jīng)干細(xì)胞的分離和培養(yǎng)30
• 1.2 神經(jīng)干細(xì)胞的鑒定30-31
• 1.3 低氧對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞存活的影響31-32
• 1.4 低氧對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響32-33
• 1.5 低氧對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞中ROS含量的影響33-34
• 1.6 自噬（線粒體自噬）抑制劑Mdivi-1 對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞中ROS含量的影響34-35
• 2. 低氧對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞自噬的影響35-37
• 2.1 低氧條件下神經(jīng)干細(xì)胞自噬水平的變化35-36
• 2.2 抑制自噬阻礙神經(jīng)干細(xì)胞的增殖36-37
• 3. 低氧條件下神經(jīng)干細(xì)胞中Wip1的表達(dá)變化及其在細(xì)胞增殖中的作用37-42
• 3.1 低氧條件下神經(jīng)干細(xì)胞中Wip1的表達(dá)變化37-38
• 3.2 敲低Wip1后觀察神經(jīng)干細(xì)胞的存活情況38-40
• 3.3 敲除Wip1后觀察神經(jīng)干細(xì)胞的存活情況40-41
• 3.4 敲低Wip1后對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞自噬活性的影響41-42
• 討論42-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 第二部分 線粒體自噬與BNIP3在腦缺血損傷中的作用研究49-69
• 縮寫詞表49-50
• 中文摘要50-53
• 英文摘要53-56
• 前言56-58
• 材料與方法58-62
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料58-60
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法60-62
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果62-65
• 1. 腦缺血不同時(shí)間點(diǎn)大鼠腦梗死體積的變化62
• 2. 線粒體形態(tài)在腦缺血過程中的改變62-63
• 2.1 p MCAO后不同時(shí)間點(diǎn)線粒體自噬自噬體的變化62-63
• 3. BNIP3和線粒體自噬相關(guān)蛋白在腦缺血中的表達(dá)變化63-65
• 3.1 p MCAO后不同時(shí)間點(diǎn)BNIP3表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化63-64
• 3.2 p MCAO后不同時(shí)間點(diǎn)線粒體自噬相關(guān)蛋白的變化64-65
• 討論65-66
• 結(jié)論66-67
• 參考文獻(xiàn)67-69
• 附錄I：論文發(fā)表情況69-70
• 附錄II：發(fā)表論文全文70-78
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷78-79
• 致謝79

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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6 北京體育大學(xué)科研中心教授 胡揚(yáng);低氧運(yùn)動(dòng)也很棒[N];健康報(bào);2010年

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7 李海生;低氧促進(jìn)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和分化及其機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號(hào)：1045867