發(fā)布時間：2017-10-17 00:18

  本文關(guān)鍵詞：基于抗核酸抗體的檢測建立初步診斷多發(fā)性硬化癥的方法

  更多相關(guān)文章： 多發(fā)性硬化癥 抗雙鏈DNA抗體 抗RNA抗體 實驗性自身免疫性腦脊髓炎模型 ELISA

【摘要】：多發(fā)性硬化癥(Multiple Sclerosis,MS)是一種較為常見的能導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)出現(xiàn)大范圍病變的自身免疫性疾病。該病的具體發(fā)病機制尚未明確,目前還未找到治療該病的特效藥,但是已有研究表明,MS病人的血清和腦脊液中出現(xiàn)抗核酸抗體,并且有抗核酸抗體在病灶處聚集的現(xiàn)象。為此,本實驗利用這一特殊現(xiàn)象,分別以質(zhì)粒和天然提取的RNA為抗原,建立了抗雙鏈DNA抗體和抗RNA抗體的間接酶聯(lián)免疫吸附實驗(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)檢測MS的方法。首先,我們使用髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白片段(Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein Peptide,MOG35-55)免疫C57BL/6雌性小鼠建立了多發(fā)性硬化癥的動物模型,即實驗性自身免疫性腦脊髓炎(Experimentally Allergic Encephalomyelitis,EAE)模型。在小鼠出現(xiàn)后肢癱瘓等EAE特征性癥狀后,我們處死小鼠并完整取出小鼠的腦組織和脊髓,通過使用脫髓鞘染色和免疫熒光技術(shù)確定動物模型建立成功。其次,我們分別建立了抗雙鏈DNA抗體和抗RNA抗體的間接ELISA檢測MS的方法�？闺p鏈DNA抗體間接ELISA檢測MS方法的最低檢出限為0.16 ng/m L,線性檢測范圍為:0.5 ng/m L-100 ng/m L;抗RNA抗體間接ELISA檢測方法優(yōu)化后的條件為:天然RNA包被濃度為20μg/m L,血清稀釋倍數(shù)為100倍。利用上述已經(jīng)建立的間接ELISA方法分析了EAE模型小鼠(n=15)和空白組小鼠(n=15)血清和腦脊液中抗雙鏈DNA抗體和抗RNA抗體,結(jié)果表明,致病組小鼠的腦脊液和血清中抗雙鏈DNA抗體和抗RNA抗體水平均顯著高于空白組(p0.01);利用上述已經(jīng)建立的間接ELISA方法分析了從吉林大學(xué)第一醫(yī)院獲得的9名臨床多發(fā)性硬化癥病人和其他五種神經(jīng)系統(tǒng)疾病各9名病人以及9名健康志愿者的血清樣品,結(jié)果表明,MS患者血清中的抗雙鏈DNA抗體的含量都在300 ng/m L以上,較其他五種神經(jīng)系統(tǒng)疾病病人及正常人血清中的抗雙鏈DNA抗體(均在50 ng/m L以下)差異顯著(p0.01);MS臨床病人血清中抗RNA抗體的檢測值都為陰性對照的2.1倍以上,顯著高于其他五種神經(jīng)系統(tǒng)疾病病人和正常人血清中抗RNA抗體的檢測值(p0.01)。上述結(jié)果表明,本研究建立的抗雙鏈DNA抗體和抗RNA抗體的間接ELISA檢測MS方法有較高的特異性和敏感性。本研究為簡便、快速、準(zhǔn)確的MS臨床診斷提供了方法和實驗基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：多發(fā)性硬化癥 抗雙鏈DNA抗體 抗RNA抗體 實驗性自身免疫性腦脊髓炎模型 ELISA
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R744.51
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 前言11-12
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述12-24
• 第一章 多發(fā)性硬化癥12-20
• 1.1 多發(fā)性硬化癥簡介12
• 1.2 發(fā)病機制及病理學(xué)12-13
• 1.3 臨床分型13-14
• 1.4 診斷方法14-16
• 1.5 動物模型的簡介16-17
• 1.6 抗DNA抗體的研究現(xiàn)狀17
• 1.7 抗雙鏈DNA抗體的檢測方法17-19
• 1.8 抗RNA抗體的研究進(jìn)展19-20
• 第二章 酶聯(lián)免疫吸附試驗20-24
• 2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)的發(fā)展歷史20
• 2.2 ELISA的原理20-21
• 2.3 ELISA的分類21-24
• 第二篇 研究內(nèi)容24-64
• 第一章 實驗性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）動物模型的建立與驗證24-30
• 1.1 材料和方法24-26
• 1.2 結(jié)果26-28
• 1.3 討論28-29
• 1.4 小結(jié)29-30
• 第二章 抗DNA抗體間接ELISA檢測方法的建立及臨床驗證30-48
• 2.1 材料和方法30-35
• 2.2 結(jié)果35-46
• 2.2.1 質(zhì)粒的提取35-36
• 2.2.2 抗原包被濃度和抗體稀釋倍數(shù)的選擇36-37
• 2.2.3 抗原包被條件的選擇37
• 2.2.4 封閉液和封閉時間的選擇37-39
• 2.2.5 抗雙鏈 DNA 抗體作用時間的選擇39-40
• 2.2.6 HRP-山羊抗小鼠 Ig G 抗體作用時間的選擇40-41
• 2.2.7 底物作用時間的選擇41-42
• 2.2.8 完成優(yōu)化的間接 ELISA 檢測程序42
• 2.2.9 間接 ELISA 標(biāo)準(zhǔn)曲線42-43
• 2.2.10 添加回收實驗43
• 2.2.11 實際樣品的檢測43-45
• 2.2.12 特異性檢測45-46
• 2.3 討論46
• 2.4 小結(jié)46-48
• 第三章 抗RNA抗體間接ELISA檢測方法的建立及臨床驗證48-64
• 3.1 材料和方法48-53
• 3.2 結(jié)果53-62
• 3.3 討論62
• 3.4 小結(jié)62-64
• 結(jié)論64-65
• 參考文獻(xiàn)65-72
• 導(dǎo)師簡介72-73
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果73-74
• 致謝74

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1045726