本文關(guān)鍵詞：Notch1信號(hào)對脂多糖刺激后未成熟星形細(xì)胞膠質(zhì)化的調(diào)控機(jī)制研究

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【摘要】：腦白質(zhì)損傷(white matter damage, WMD)是早產(chǎn)兒腦損傷最常見的類型。宮內(nèi)感染、炎癥,可引起神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的損傷,是導(dǎo)致早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷的重要原因,宮內(nèi)感染后腦內(nèi)炎癥反應(yīng)影響未成熟星形細(xì)胞的增殖和膠質(zhì)化是腦白質(zhì)損傷關(guān)鍵因素之一,Notch1/Hes (Hairy enhallcer of spli信號(hào)可能參與宮內(nèi)感染/炎癥后未成熟星形細(xì)胞的增殖和膠質(zhì)化機(jī)制。目的：研究脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)刺激后Notch1信號(hào)對未成熟星形細(xì)胞膠質(zhì)化的調(diào)控作用及對膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glail fibrillary acidic protein, GFAP)基因啟動(dòng)子區(qū)STAT3結(jié)合位點(diǎn)CpG島甲基化水平的影響,從細(xì)胞分化角度進(jìn)一步闡明官內(nèi)感染/炎癥導(dǎo)致早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷的機(jī)制。方法：1.取胎鼠腦組織行細(xì)胞培養(yǎng),免疫熒光法檢測(GFAP+/BrdU+(5-溴脫氧尿嘧啶核苷,5-Bromo-2-deoxyUridine)及熒光定量RT-PCR法(realtime fluorescence quantitative PCR,QPCR)檢測星形細(xì)胞增殖細(xì)胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen, PNCA)、增殖細(xì)胞核抗原Ki67 (nuclcar-associated antigen Ki67, Ki67)的表達(dá)變化,同時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測LPS刺激后Notch1、Notch1細(xì)胞內(nèi)區(qū)域(Notch intracellulardomains, NICD)及Hes1、Hes5在星形膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)變化特點(diǎn)。2.以Notch1 ICD-pEGFP載體轉(zhuǎn)染星形膠質(zhì)細(xì)胞增強(qiáng)Notch1信號(hào)通路下游信號(hào)的表達(dá),以及構(gòu)建Notch1 siRNA轉(zhuǎn)染星形膠質(zhì)細(xì)胞,采用RNA干擾(RNAi)技術(shù)抑制Notch1基因的表達(dá),此外予MW167干預(yù)后熒光定量RT-PCR法檢測Notch1、ICD及Hes1、Hes5在星形膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)變化。免疫熒光法檢測GFAP+/BrdU+以及QPCR檢測星形細(xì)胞PNCA、Ki67的表達(dá)變化。3.予LPS刺激未成熟星形細(xì)胞,構(gòu)建不同質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染,對星形細(xì)胞Notchl信號(hào)予過表達(dá),研究星形細(xì)胞GFAP基因啟動(dòng)子區(qū)STAT3結(jié)合位點(diǎn)CpG島甲基化水平變化。結(jié)果：1.LPS(5ug/ml)刺激星形細(xì)胞后, GFAP+/BrdU+細(xì)胞數(shù)較對照組增加(P0.05)；QPCR檢測PCNA、Ki67 mRNA的相對表達(dá)量均增加(P0.05)。隨時(shí)間增加,Notch1-ICD、Hesl、Hes5 mRNA的表達(dá)量均上調(diào)(P0.05)。Notchl、ICD、Hesl、 Hes5蛋白的表達(dá)量均上調(diào)(P0.05)。2. LPS (5ug/ml)刺激時(shí),若上調(diào)Notchl,可以提高GFAP+/BrdU+的比例(P0.05); Notchl-ICD、PCNA、Ki67、Hes1、Hes5 mRNA全部都上調(diào)(P0.05); Notch1、 ICD、PCNA、Ki67、Hes1、Hes5蛋白的表達(dá)全部上調(diào)(P0.05); cck8增加(P0.05)。3. LPS (5ug/ml)刺激時(shí),若下調(diào)Notchl,可以降低GFAP+/BrdU+的比例(P0.05); Notchl-ICD、PCNA、Ki67、Hes1、Hes5 mRNA全部都下調(diào)(P0.05); Notchl. ICD、PCNA、Ki67、Hes1、Hes5蛋白的表達(dá)全部下調(diào)(P0.05)；cck8減少(P0.05)。4. Notch1 ICD過表達(dá)組較陰性對照組細(xì)胞來看,甲基化程度明顯降低(P0.05)。結(jié)論：1.LPS刺激促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和膠質(zhì)化。2.LPS刺激促進(jìn)Notch1及其下游信號(hào)Hes1、Hes5的表達(dá)。3.LPS刺激后,Notch1信號(hào)通路能正調(diào)控星形細(xì)胞的增殖及膠質(zhì)化,有可能通過其下游信號(hào)通路Hes1、Hes5發(fā)揮作用。4.LPS刺激后Notch1信號(hào)對未成熟星形細(xì)胞增殖和膠質(zhì)化行為的調(diào)控,可能通過調(diào)控GFAP基因啟動(dòng)子區(qū)STAT3結(jié)合位點(diǎn)CpG島去甲基化過程。
【關(guān)鍵詞】：脂多糖 炎癥 星形細(xì)胞 Notch1
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R742
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 縮略詞表12-15
• 引言15-17
• 第一部分 脂多糖刺激對未成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖和膠質(zhì)化影響的研究17-31
• 1 前言17-19
• 2 實(shí)驗(yàn)材料和方法19-23
• 3 結(jié)果23-28
• 4 討論28-30
• 5 結(jié)論30-31
• 第二部分 脂多糖刺激后Notchl信號(hào)對未成熟星形細(xì)胞膠質(zhì)化的調(diào)控機(jī)制研究31-63
• 1 前言31-34
• 2 實(shí)驗(yàn)材料和方法34-42
• 3 結(jié)果42-59
• 4 討論59-62
• 5 結(jié)論62-63
• 全文結(jié)論63-64
• 參考文獻(xiàn)64-69
• 綜述69-79
• 參考文獻(xiàn)75-79
• 作者簡歷及在學(xué)期間所取得的科研成果79

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 張硯敏;苗文紅;王華;許鵬;;復(fù)方霜蠣消結(jié)制劑對小鼠乳腺癌的抑瘤作用及相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究[J];現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2010年04期

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本文編號(hào)：1029984