目的：MicroRNA(miRNA)是一類廣泛存在于真核生物中的具有高度保守序列的非編碼RNA，長度為20-22個核苷酸。miRNA通過結(jié)合靶基因的3′-untranslatedregion (UTR)來調(diào)控靶基因的表達，在轉(zhuǎn)錄后水平抑制靶基因的表達或翻譯。大量證據(jù)表明miRNA在腫瘤的發(fā)展，分化，凋亡及增殖過程中起關(guān)鍵作用。研究表明miR-152在前列腺癌等多種腫瘤組織中低表達，但其在前列腺癌中的功能尚不清楚，本課題擬進一步研究miR-152在前列腺癌發(fā)生，發(fā)展中的分子機制。 材料和方法：采用TaqMan熒光定量RT-PCR方法檢測48例前列腺癌組織和15例前列腺正常組織的樣本中miR-152的表達水平。Western blot檢測三對前列腺癌組織和癌旁正常組織中轉(zhuǎn)化生長因子-α（TGFα）的蛋白表達水平。運用流式細胞檢測（周期和凋亡）、遷移實驗、侵襲實驗檢測及Western blot分析評估m(xù)iR-152和TGFα表達變化對前列腺細胞系PC-3和DU145中的影響。雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灤_定miR-152是否通過TGFα的3’-UTR區(qū)域直接調(diào)控TGFα。 結(jié)果：與正常前列腺組織相...

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【學(xué)位級別】：碩士

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圖.1載體圖譜：pGL3-ControlVector13質(zhì)粒轉(zhuǎn)化

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文20圖.1載體圖譜：pGL3-ControlVector13質(zhì)粒轉(zhuǎn)化在無菌狀態(tài)下將新鮮感受態(tài)細菌在冰上融化。菌液融化后加入10μg熒光素酶報告基因質(zhì)粒，用移液器輕輕吹打混勻，在冰上放置30min，后在水浴箱42°C熱休克90s，之后繼續(xù)放置....

圖.2RT-PCR檢測miR-152在前列腺癌及其正常組織中的表達情況

25圖.2RT-PCR檢測miR-152在前列腺癌及其正常組織中的表達情況。(A)常組織相比，miR-152在前列腺癌表達水平是下降的。(B)miR-152在不同Gscores評分前列腺癌組織中的表達情況。(C)miR-152在不同T分級前列腺織中的表達情況。....

圖.3Westernblot檢測TGFα的蛋白表達水平，GAPDH為內(nèi)參.N和T分別

南京醫(yī)科大Figure.2miR-152expressioninresectedprostatecancer(PCa)sampbyreal-timeRT-PCR.(A)LossofmiR-152expressioninPCatissuescn....

圖.4RT-PCR檢測在前列腺癌PC-3細胞轉(zhuǎn)染miR-152mimics后miR-152的表達水平

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位轉(zhuǎn)染miR-152mimics后前列腺癌細胞株P(guān)C-3和DU145的侵襲能力明顯低于染NC組。結(jié)果表明：過表達miR-152后，腫瘤細胞的遷移和侵襲能力明顯減(圖.5)。在圖6A顯示，轉(zhuǎn)染miR-152mimics后前列腺癌細胞株P(guān)....

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