第一部分hepaCAM基因腺病毒載體構(gòu)建和鑒定 目的：構(gòu)建表達hepaCAM基因的重組腺病毒并在膀胱癌BIU-87細(xì)胞中鑒定。 方法：以pEGFP-N2-hepaCAM質(zhì)粒載體為模板，PCR擴增hepaCAM基因；將hepaCAM基因克隆到穿梭質(zhì)粒pAdtrack-CMV，構(gòu)建穿梭載體pAdtrack-CMV-hepaCAM；經(jīng)PmeI線性化后，在含pAdEasy-1的大腸桿菌BJ5183中進行同源重組，篩選陽性克��；線性化后在HEK-293細(xì)胞中包裝、擴增，利用報告基因EGFP進行病毒滴度檢測；實時熒光定量PCR，Western blot鑒定感染腺病毒的膀胱癌BIU-87細(xì)胞中hepaCAM基因的表達。 結(jié)果：測序、酶切驗證重組腺病毒載體pAdEasyI-hepaCAM構(gòu)建成功；病毒滴度可達1.6×1012；熒光定量PCR、 Western blot均顯示感染hepaCAM腺病毒后膀胱癌BIU-87細(xì)胞中hepaCAM基因表達增高。 結(jié)論：成功構(gòu)建hepaCAM腺病毒載體。 第二部分5-氮雜胞嘧啶核苷通過逆轉(zhuǎn)hepaCAM基因啟動子甲基化抑制膀胱癌細(xì)胞增殖 目的：探究去甲基化藥物5-...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1hepaCAM基因PCR擴增產(chǎn)物凝膠電泳圖

e)化學(xué)發(fā)光在暗室條件下，將發(fā)光液A、B液按所需量1:1吸干殘留液體，用移液器將混勻的發(fā)光液均勻地覆蓋于PV儀器中成像。7統(tǒng)計分析所有數(shù)據(jù)都用SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析，結(jié)果都以（x析方法對不同組間數(shù)據(jù)進行比較，結(jié)果以p<0.05表示統(tǒng)計具果Hep....

圖1.2重組穿梭質(zhì)粒的PCR驗證Fig.1.2IdentificationofrecombinantshuttleplasmidwithPCRM:DNAmarkerDL2000;1,2,3,4,5,6:hepaCAM基因PCR擴增產(chǎn)物

圖1.2重組穿梭質(zhì)粒的PCR驗證Fig.1.2IdentificationofrecombinantshuttleplasmidwithPCRM:DNAmarkerDL2000;1,2,3,4,5,6:hepaCAM基因PCR擴增產(chǎn)圖1.3....

圖1.3重組穿梭質(zhì)粒的PCR驗證Fig.1.3Identificationofrecombinantshuttleplasmidwithrestrictiveenzymedigestion

圖1.3重組穿梭質(zhì)粒的PCR驗證Fig.1.3IdentificationofrecombinantshuttleplasmidwithrestrictiveenzymedigestionM:DNAmarkerDL2000;1,2:kpnI和....

圖1.4重組穿梭質(zhì)粒測序結(jié)果

圖1.2重組穿梭質(zhì)粒的PCR驗證Fig.1.2IdentificationofrecombinantshuttleplasmidwithPCRM:DNAmarkerDL2000;1,2,3,4,5,6:hepaCAM基因PCR擴增產(chǎn)物圖1.....

本文編號：3994000