目的觀察微小RNA122(miR-122)通過靶向調(diào)控環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白1(CREB1)對膀胱癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響,并探討其可能的作用通路。方法 Target Scan7.1軟件預(yù)測程序顯示,miR-122與CREB1啟動子區(qū)存在連續(xù)的結(jié)合位點(diǎn),雙熒光素酶基因報告實(shí)驗結(jié)果顯示,在膀胱癌J82細(xì)胞中miR-122可靶向負(fù)調(diào)控CREB1。將J82細(xì)胞分為三組,共轉(zhuǎn)染組采用LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染miR-122 mimic及CREB1過表達(dá)質(zhì)粒,miR-122 mimic組轉(zhuǎn)染miR-122 mimic,對照組轉(zhuǎn)染對照質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染48 h。采用MTS法和平板克隆實(shí)驗檢測細(xì)胞增殖能力(分別以增殖OD值和克隆形成數(shù)表示),Transwell小室實(shí)驗檢測細(xì)胞侵襲能力(以穿膜細(xì)胞數(shù)表示),Western blotting法檢測細(xì)胞CREB1及蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt (p-Akt)、雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、磷酸化m TOR(p-mTOR)蛋白表達(dá)。結(jié)果與對照組比較,miR-122 mimic組和共轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖OD值、克隆形成數(shù)、穿膜細(xì)胞數(shù)均降低,且miR...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 miR-122與CREB1的靶向調(diào)控關(guān)系分析
    1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及分組轉(zhuǎn)染
    1.4 轉(zhuǎn)染效果檢測
    1.5 細(xì)胞增殖能力觀察
    1.6 細(xì)胞侵襲能力觀察
    1.7 細(xì)胞CREB1及Akt/m TOR信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)檢測
    1.8 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 雙熒光素酶基因報告實(shí)驗結(jié)果
    2.2 各組細(xì)胞miR-122、CREB1 mRNA表達(dá)比較
    2.3 各組細(xì)胞增殖、侵襲能力比較
    2.4 各組細(xì)胞CREB1及Akt/m TOR信號通路蛋白表達(dá)比較
3 討論



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