本文關(guān)鍵詞：不同照射方式下核黃素-A波紫外線交聯(lián)作用對(duì)兔鞏膜成纖維細(xì)胞MMP-2表達(dá)及生物力學(xué)變化影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：旨在研究不同照射方式的核黃素A-波紫外線兔鞏膜膠原交聯(lián)實(shí)驗(yàn)對(duì)兔鞏膜成纖維細(xì)胞MMP-2表達(dá)及細(xì)胞生物力學(xué)性能的影響,及兩種照射方式是否對(duì)視網(wǎng)膜造成損傷。方法：將新西蘭白兔24只隨機(jī)分為A、B兩組,選取左眼選為實(shí)驗(yàn)眼,右眼選為對(duì)照眼,麻醉后分離左眼的內(nèi)外直肌間的球結(jié)膜和筋膜,以暴露鼻上方鞏膜。在該處?kù)柲さ渭?.1%5-磷酸核黃素5分鐘后,用波長(zhǎng)為370nm的紫外線的照射,A組照射時(shí)間為30分鐘,功率為3.0mW/cm2,B組照射時(shí)間為9分鐘,功率為10.0mW/cm2。術(shù)后1周進(jìn)行全視野視網(wǎng)膜電流圖(full-field electroretinogram f-ERG)檢測(cè)。術(shù)后60天,處死實(shí)驗(yàn)兔后取實(shí)驗(yàn)眼交聯(lián)部位及對(duì)照眼相應(yīng)部位的鞏膜組織提取并培養(yǎng)鞏膜成纖維細(xì)胞,用免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定成纖維細(xì)胞后,進(jìn)行細(xì)胞微管吸吮實(shí)驗(yàn)及MMP-2蛋白表達(dá)的western blot實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行分析,t檢驗(yàn),P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1兔f-ERG檢查結(jié)果視網(wǎng)膜電流圖表明,A、B兩組的左(交聯(lián)眼)右眼(對(duì)照眼)間,暗應(yīng)3.0及明適應(yīng)3.0的振幅、潛伏期均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2鞏膜成纖維細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定結(jié)果組織培養(yǎng)法提取的鞏膜細(xì)胞免疫組織化學(xué)法的鑒定法顯示：細(xì)胞Vimentin染色呈陽(yáng)性,胞漿內(nèi)可見清晰的棕黃色陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物,Desmin染色呈陰性,keratin染色呈陰性,S-100染色也呈陰性,上述觀察結(jié)果表明所提取并培養(yǎng)的細(xì)胞為鞏膜成纖維細(xì)胞。3鞏膜成纖維細(xì)胞微管吸吮本實(shí)驗(yàn)采用微管吸吮技術(shù)測(cè)量不同照射方式下,鞏膜細(xì)胞的楊氏模量、表觀粘性發(fā)現(xiàn)：A、B兩組實(shí)驗(yàn)眼(左眼)鞏膜細(xì)胞的楊氏模量、表觀粘性均分別與各自對(duì)照眼(右眼)鞏膜細(xì)胞的楊氏模量、表觀粘性有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),而A、B兩組實(shí)驗(yàn)眼間、及對(duì)照眼間鞏膜細(xì)胞的楊氏模量、表觀粘性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。以上結(jié)果表明,交聯(lián)術(shù)后鞏膜細(xì)胞的粘彈性發(fā)生了明顯的變化,具體表現(xiàn)為粘彈性顯著升高。而兩種照射方式,鞏膜細(xì)胞的粘彈性沒有顯著性的差異。4鞏膜成纖維細(xì)胞MMP-2的表達(dá)經(jīng)過(guò)對(duì)所提取并培養(yǎng)的鞏膜成纖維細(xì)胞中MMP-2的western bolt實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：A組左眼(照射時(shí)間為30分鐘,功率為3.0mW/cm2)及B組左眼(照射時(shí)間為9分鐘,功率為10.0mW/cm2)提取的鞏膜成纖維細(xì)胞MMP-2表達(dá)明顯高于兩組對(duì)照眼提取的鞏膜成纖維細(xì)胞中MMP-2的表達(dá)。對(duì)于兩種不同的照射方式,A組左眼(照射時(shí)間為30分鐘,功率為3.0mW/cm2)鞏膜成纖維細(xì)胞MMP-2的表達(dá)顯著高于B組左眼(照射時(shí)間為9分鐘,功率為10.0mW/cm2)鞏膜成纖維細(xì)胞MMP-2的表達(dá)。而A、B兩組右眼(對(duì)照眼)鞏膜成纖維細(xì)胞中MMP-2的表達(dá)未見明顯差異。經(jīng)圖像分析軟件掃描,及統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算,A、B兩組左眼(交聯(lián)眼)鞏膜成纖維細(xì)胞中MMP-2的表達(dá)量分別為各自組對(duì)照眼的1.8倍和1.3倍,差異具有顯著性(t檢驗(yàn),P=0.001,0.032)；A、B兩組交聯(lián)眼之間比較,鞏膜成纖維細(xì)胞中MMP-2的表達(dá)量差異具有顯著意義(t檢驗(yàn),P=0.041)；而A、B兩組右眼(對(duì)照眼)間比較,鞏膜成纖維細(xì)胞MMP-2的表達(dá)未見顯著性差異(t檢驗(yàn),P0.05)。結(jié)論：1核黃素A-波紫外線兔鞏膜膠原交聯(lián)實(shí)驗(yàn)中,選用兩種不同的照射方式,對(duì)視網(wǎng)膜功能均無(wú)影響,具有較好的安全性。2兩種不同的照射方式,均能使鞏膜成纖維細(xì)胞的生物力學(xué)性能發(fā)生顯著增強(qiáng),而兩種照射方式之間并未見明顯的差別。3兩種不同的照射方式均可使鞏膜成纖維細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2的表達(dá)量顯著升高,并且A、B兩組交聯(lián)眼鞏膜成纖維細(xì)胞間存在顯著性差異,一定程度上可以說(shuō)明這兩種不同的照射方式影響鞏膜細(xì)胞基質(zhì)代謝的程度有所不同。
【關(guān)鍵詞】：核黃素 A-波紫外線鞏膜膠原交聯(lián) 全視野視網(wǎng)膜電流圖 鞏膜 成纖維細(xì)胞 微管吸吮 MMP-2 western blot
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R778.11
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-11
• 材料與方法11-18
• 結(jié)果18-20
• 附圖20-27
• 附表27-29
• 討論29-34
• 結(jié)論34
• 參考文獻(xiàn)34-39
• 綜述 核黃素A-波紫外線鞏膜膠原交聯(lián)治療高度近視可行性的思考39-48
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 致謝48-49
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷49

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本文編號(hào)：291359