本文關鍵詞：急性大鼠脊髓損傷的蛋白組學初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【目的】通過比較裂解液法、TCA-丙酮法和酚抽提取法提取大鼠脊髓蛋白的效率,選擇最適合的大鼠脊髓蛋白提取方法;研究大鼠急性脊髓損傷前后差異表達的蛋白質(zhì),分析這些蛋白質(zhì)生物學功能,為更加深入的了解脊髓損傷后復雜的病生理過程提供理論依據(jù)�！静牧虾头椒ā勘緦嶒炋崛≌４菩訵istar大鼠T10前后1cm的脊髓組織,分別采用裂解液提取法、TCA-丙酮提取法和酚抽提取法提取脊髓蛋白,通過比較Bradford法測量蛋白質(zhì)的濃度,SDS-PAGE電泳和雙向電泳分析提取蛋白的種類和數(shù)量,選擇適合大鼠脊髓蛋白提取的最佳方案。成年雌性大鼠9只,隨機分成3組,每組3只。對照組不進行脊髓打擊,僅采用同等劑量進行麻醉,椎板切除后直接取材。實驗組采用IMPACTOR MODEL-Ⅱ打擊器建立T10脊髓損傷模型(打擊力度為10g×25mm),根據(jù)取材時間的不同分成3h組和8h組。采用已經(jīng)建立的大鼠脊髓蛋白提取方案提取蛋白,通過雙向電泳技術分離各組提取的蛋白;采用PDQuest軟件分析和比較對照組和實驗組的膠圖,尋找上調(diào)或者下調(diào)差異表達的蛋白;采用MALDI-TOF/TOF對這些蛋白質(zhì)進行肽質(zhì)量指紋圖譜和二級質(zhì)譜鑒定;通過NCBI和Uni Prot KB數(shù)據(jù)庫對這些蛋白進行亞細胞定位和功能注解;STRING軟件對差異蛋白進行通路分析。根據(jù)已建立的大鼠脊髓蛋白提取方案提取對照組,3h組和8h組蛋白質(zhì),通過Western Blot技術對已鑒定的關鍵差異蛋白進行驗證�！窘Y果】1.與裂解液法和酚抽提取法相比,TCA-丙酮提取法提取蛋白在SDS-PAGE電泳上有更多清晰的條帶,在雙向電泳上有這更多的蛋白斑點,所以本實驗采用TCA-丙酮提取法為最佳大鼠脊髓蛋白提取方法。2.實驗組和對照組相比,共有30個差異表達的蛋白。包括9個代謝相關蛋白,6個氧化應激蛋白,5個神經(jīng)纖維束蛋白,3個骨架蛋白,3個能量相關酶,1個細胞轉(zhuǎn)導蛋白,3個其它。其中11個上調(diào),19個下調(diào)。3.GFAP蛋白在損傷后3h表達明顯下降,8h表達量開始回升,與雙向電泳的實驗結果相符。結論本研究發(fā)現(xiàn)TCA-丙酮蛋白提取法最適合大鼠脊髓蛋白提取,應用蛋白組學技術篩選急性大鼠脊髓損傷前后的蛋白,繪制差異表達的蛋白譜,尋找潛在的與脊髓損傷相關的特異分子標志物和探索脊髓損傷后復雜級聯(lián)病生理機制,為將來進一步脊髓損傷的治療提供可靠的實驗依據(jù)。
【關鍵詞】：脊髓損傷 蛋白提取 蛋白組學 wistar大鼠 GFAP
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R651.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-15
• 研究現(xiàn)狀、成果11-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、大鼠脊髓蛋白提取方法的選擇15-27
• 1.1 對象和方法15-22
• 1.1.1 實驗材料15-18
• 1.1.2 實驗方法18-22
• 1.2 結果22-25
• 1.2.1 三種提取方法的蛋白濃度22
• 1.2.2 三種提取方法的SDS-PAGE結果分析22-23
• 1.2.3 三種提取方法的雙向電泳圖結果23-25
• 1.3 討論25-26
• 1.4 小結26-27
• 二、急性大鼠脊髓損傷后蛋白組學研究27-40
• 2.1 對象和方法27-29
• 2.1.1 實驗材料27
• 2.1.2 實驗方法27-29
• 2.2 結果29-37
• 2.2.1 不同時間點的雙向電泳圖29-31
• 2.2.2 差異蛋白的質(zhì)譜鑒定31-35
• 2.2.3 差異蛋白的分類35-37
• 2.3 討論37-39
• 2.4 小結39-40
• 三、GFAP表達的Western blot組學研究40-45
• 3.1 對象和方法40-42
• 3.1.1 實驗材料40-41
• 3.1.2 實驗方法41-42
• 3.2 結果42-43
• 3.3 討論43-44
• 3.4 小結44-45
• 結論45-46
• 參考文獻46-54
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明54-55
• 附錄55-62
• 綜述 脊髓損傷的蛋白質(zhì)組學研究進展62-72
• 綜述參考文獻67-72
• 致謝72

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 徐蓉;盧明;;銅及銅鋅超氧化物歧化酶對神經(jīng)保護作用的研究進展[J];國際神經(jīng)病學神經(jīng)外科學雜志;2011年05期

  本文關鍵詞：急性大鼠脊髓損傷的蛋白組學初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：290969