本文關(guān)鍵詞：血水草生物堿對釘螺肝臟損傷機理的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】： 血水草Eomecon chionantha Hance)是罌粟科(Papaveraceae)白屈菜族(Chelidonium)血水草屬(Eomecon)多年生野生草本植物,為我國特有的單屬、種植物,資源豐富,具有多種藥理作用。已證實從血水草根及根莖中提取的生物堿(Eomecon chionantha alkaloids, ECA)有較好的殺滅釘螺作用,是一種具有開發(fā)前景的植物殺螺劑。進行ECA滅螺的機理研究將為血水草作為植物殺螺劑的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。 本研究是國家自然科學(xué)基金及長沙市科技局項目的部分研究內(nèi)容。以釘螺肝臟為樣本,探討ECA殺螺機理。實驗依照WHO規(guī)定的“殺螺劑實驗室終篩方法”的浸泡法,分別用10mg/L ECA和清水浸泡釘螺36h,解剖活螺,分離肝臟：①測定釘螺肝臟總蛋白質(zhì)和糖原含量,丙二醛(MDA)水平,丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)和乳酸脫氫酶(LDH)的活性；②建立針對釘螺肝臟蛋白質(zhì)組陣列分離的雙向電泳方法,分離釘螺肝臟蛋白質(zhì),篩選差異蛋白質(zhì)點,并予質(zhì)譜鑒定；③提取肝細胞DNA,進行DNA瓊脂糖凝膠電泳；④搗碎肝組織,獲取肝細胞懸液,經(jīng)流式細胞術(shù)分析ECA誘導(dǎo)釘螺肝細胞凋亡的狀況。研究獲得了如下主要結(jié)果： (1)ECA浸泡后釘螺肝臟總蛋白質(zhì)和糖原含量均顯著降低,AKP、ALT、AST、LDH酶活性明顯下降,與清水對照組相比,均存在顯著性差異(P0.05)；而ACP及MDA的活性差異不具有顯著性(P0.05)。 (2)成功建立了釘螺肝臟蛋白質(zhì)雙向電泳方法,獲得了分辨率高、重復(fù)性好的雙向電泳圖譜,經(jīng)ImageMaster 2D 5.0軟件分析,ECA處理組和清水對照組分別檢測到354±10個和311±12個蛋白質(zhì)點(n=3)；質(zhì)譜鑒定獲得假定蛋白、ENSANGP00000022175蛋白、醛脫氫酶、未知蛋白、ENSANGP00000027067蛋白、類似錨蛋白3的1亞型4亞亞型蛋白、相似A型肝炎病毒短型細胞受體1的蛋白、線粒體異檸檬酸脫氫酶2樣蛋白、類似角蛋白的蛋白、角蛋白10、角蛋白1共11個蛋白質(zhì)點,這些蛋白質(zhì)均為ECA處理后表達上調(diào)的蛋白質(zhì)。 (3)ECA處理后釘螺肝細胞DNA瓊脂糖凝膠電泳未觀察到典型DNA Ladder圖譜；經(jīng)流式細胞儀檢測ECA處理組和清水對照組的釘螺肝細胞早期凋亡細胞率分別為13.77%與13.70%；晚期凋亡細胞率分別為10.74%與10.62%；則總凋亡率分別為24.51%和24.32%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 從以上研究結(jié)果得出如下結(jié)論：(1)ECA抑制釘螺肝臟AKP、ALT、AST、LDH酶活性,影響釘螺肝臟糖及蛋白質(zhì)代謝,破壞代謝平衡,導(dǎo)致肝功能紊亂是釘螺死亡的重要原因之一。(2)成功建立了釘螺肝臟蛋白質(zhì)雙向電泳條件。 (3)ECA作用后釘螺肝臟蛋白質(zhì)表達發(fā)生改變。成功鑒定的11個差異蛋白質(zhì)點,為進一步研究ECA對釘螺肝臟的損傷機理提供了重要線索。 (4)初步證實細胞凋亡不是ECA誘導(dǎo)釘螺肝細胞死亡的主要途徑。
【關(guān)鍵詞】：血水草生物堿 釘螺 肝臟 酶 蛋白質(zhì)組學(xué)
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R184
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• 英文摘要6-11
• 引言11-14
• 1 文獻綜述14-24
• 1.1 血水草生物堿的化學(xué)組成14-17
• 1.2 血水草生物堿的藥理作用17-18
• 1.3 血水草生物堿主要成分的藥理作用18-23
• 1.4 結(jié)語23-24
• 2 血水草生物堿致釘螺肝臟糖、脂、總蛋白和酶活性的變化24-38
• 2.1 材料與方法24-29
• 2.2 實驗結(jié)果29-33
• 2.3 討論33-38
• 3 血水草生物堿致釘螺肝臟蛋白質(zhì)差異表達分析38-65
• 3.1 材料與方法38-49
• 3.2 實驗結(jié)果49-59
• 3.3 討論59-65
• 4 血水草生物堿誘導(dǎo)釘螺肝臟細胞凋亡的檢測65-73
• 4.1 材料與方法65-68
• 4.2 實驗結(jié)果68-70
• 4.3 討論70-73
• 結(jié)論73-74
• 參考文獻74-79
• 附錄79-80
• 中英文縮略詞對照表80-81
• 致謝81-82

【引證文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 黃炳生;李明亞;;植物源滅釘螺藥的研究進展[J];中藥材;2012年06期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郭丹釗;分離自商陸的根際真菌SL-30殺滅釘螺作用研究[D];江蘇大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 彭飛;血水草白屈菜紅堿滅螺效果及對釘螺肝臟損傷機理的研究[D];湖南師范大學(xué);2012年

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本文編號：430328