目的：了解天津市麻疹病毒(measles virus,MV)流行株的基因型并在本實驗室建立分子病毒學的研究方法。方法：將2002年天津市的麻疹散發(fā)病人尿液標本中分離到的麻疹病毒12株用EB病毒轉(zhuǎn)化的絨猴淋巴細胞(B95a細胞)復蘇后，提取其總RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(RT—PCR)方法擴增出核蛋白(N)基因碳末端590個核苷酸片段，用BcnⅠ內(nèi)限酶進行限制性片段長度多態(tài)性分析(RFLP)后，選取了3株與PMD-18T Vector構(gòu)建重組質(zhì)粒。對重組質(zhì)粒進行核酸序列測定，并對N基因碳末端456個核苷酸進行序列系統(tǒng)樹分析。結(jié)果：RT—PCR后12份均檢測出590bp的特異性N基因目的條帶，經(jīng)RFLP后，顯示兩種類型的譜帶。通過對3株病毒重組質(zhì)粒的序列測定和分析證明，3株均為麻疹病毒H1基因型，其中1株為H1b亞型，另外兩株為H1a亞型。H1a的2株的456個核苷酸與H1b株的差異為3.07～4.17％。這3株的456個核苷酸與A基因型代表株序列的基因差異為6.36～7.23％，與H1基因型代表株的基因差異為1.53～2.41％。3株與A基因型代表株序列相比氨基酸有義突變共達16處。結(jié)論：2002年天津市麻疹散發(fā)病例的核酸序列為H基因型，本研究中所建立的實驗方法可用于今后繼續(xù)監(jiān)測我市麻疹流行株的基因變異，對我國加速麻疹控制及麻疹消除、消滅是十分必要的。
【學位單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2003
【中圖分類】：R181.3
【部分圖文】：

用QiagenRNA抽提試劑盒提取的RNA，以RNA單鏈為模板，用引物Pl和PZ擴增N基因片段，12份都產(chǎn)生了預期的590bp特異產(chǎn)物帶，陰性對照不被該引物所擴增。說明存在特異的RNA序列，電泳結(jié)果如圖1所示。

將麻疹病毒N基因片段用內(nèi)切酶Bcnl經(jīng)酶切后，12份中MV-9得到兩個290bp左右的片段，其余11份均被切為約290bp、80bp、230bp的三個片段。以加入去離子水為陰性對照，電泳結(jié)果如圖2所示。

(二)PCR產(chǎn)物的純化及含量估計經(jīng)Promega公司的PCR產(chǎn)物純化試劑盒提純的DNA溶于去離子水中，瓊脂糖凝膠電泳如圖3。鑒于條件所限，沒有通過檢測其吸光度估計含量。
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本文編號：2877319