【摘要】： 目的 克隆、表達(dá)和純化p53蛋白；制備雞抗人p53蛋白的IgY抗體；建立血清p53蛋白和抗體的ELISA方法；初步描述血清p53蛋白和抗體在不同人群中的分布。 方法 擴(kuò)增p53結(jié)構(gòu)基因序列，插入到原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-1中，在大腸桿菌B121中誘導(dǎo)表達(dá)；以純化的融合蛋白為抗原免疫母雞，，得到抗p53—IgY；在此基礎(chǔ)上建立間接ELISA和雙抗體夾心ELISA方法，分別檢測不同人群血清抗體和p53蛋白，采用描述性方法比較各組人群p53蛋白和抗體陽性情況。 結(jié)果 SDS—PAGE顯示表達(dá)的GST-p53融合蛋白分子量約為80Kda；制備的抗p53—IgY可特異性識別原核細(xì)胞中的p53蛋白，不識別包括GST在內(nèi)的其它細(xì)菌蛋白；間接ELISA和雙抗體夾心ELISA檢測結(jié)果顯示，不同人群和不同惡性腫瘤的血清p53蛋白和抗體陽性率不同，蛋白陽性率最高的為職業(yè)暴露組(11.14％)和前列腺癌(12.50％)；抗體陽性最高的是惡性腫瘤組(14.59％)和卵巢癌(41.67％)；正常人群組蛋白和抗體陽性率分別為0.34％和1.02％；在部分癌前病變(如肝硬化、慢性乙肝、慢性胃炎、胃潰瘍和慢性闌尾炎)中也檢出p53抗體。 結(jié)論 p53血清學(xué)指標(biāo)在一定程度上反映了暴露、疾病和基因變化情況。觀察血清p53變化的規(guī)律有助于對接觸環(huán)境和職業(yè)致癌物的高危人群進(jìn)行健康監(jiān)護(hù)以及惡性腫瘤患者的早期診斷。在臨床疾病的監(jiān)測以及腫瘤病人的診斷中，血清p53抗體的應(yīng)用價值較大；在職業(yè)致癌物暴露的監(jiān)測中則以血清p53蛋白更為敏感。血清p53指標(biāo)作為一種高特異、無創(chuàng)性、方法簡便的腫瘤和職業(yè)暴露標(biāo)志物就具有一定的實用價值。
【圖文】：

酶切結(jié)果證實，該大質(zhì)粒可被切成分子量大約為49O0bP和1200bP的兩條帶，對照質(zhì)粒只有一條分子量約4900bp的條帶(圖1一1)。(三)序列測定序列測定證實該序列全長1179bp，與p53結(jié)構(gòu)基因的編碼序列一致(附圖1一2)。二重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白的誘導(dǎo)為了使目的基因更好地表達(dá)，對影響表達(dá)的四個條件進(jìn)行了優(yōu)化。這四個誘導(dǎo)條件包括誘導(dǎo)時機、誘導(dǎo)時間、誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)劑濃度。結(jié)果顯示，在菌液A6儀〕值為0.5時開始，加入0.3mmof幾濃度的誘導(dǎo)劑，在37℃誘導(dǎo)5h的蛋白表達(dá)量最高。一(二)重組蛋白的純化用超聲波破碎細(xì)菌，離心后取上清和沉淀進(jìn)行SDS一PAGE，發(fā)現(xiàn)融合蛋白主要存在于上清中。上清經(jīng)GsT-sePharose一4B特異性吸附后

蛋白陽性血清120份，陽性率為4.88%;抗體陽性巧8份，陽性率為6.43%。各組之間p53蛋白和抗體陽性不同，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(表3一3，圖3一l)。表3一3不同組別血清p53蛋白和抗體檢出情況組別例數(shù)蛋自陽性數(shù)%xZP抗體陽性數(shù)%x“P止常人群組30.3491.02職業(yè)暴露組8711.1462.63107.870.00010.09111.790.000244.2214.591204.886.439189汗87(78’22f561345.…，‘‘、n藝臨床對照組惡性腫瘤組合計
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R181.3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號：2659997