本文選題：人偏肺病毒 + 呼吸道合胞病毒�。� 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2010年博士論文

【摘要】： PART I:重慶地區(qū)兒童以醫(yī)院為基礎(chǔ)的人偏肺病毒感染分子流行病學(xué)研究 目的:了解重慶地區(qū)急性下呼吸道感染(acute lower respiratory tract infection,ALRTI)住院兒童人偏肺病毒(human metapneumovirus, hMPV)分子流行病學(xué)特點(diǎn)和臨床特征。 方法:收集2006年4月到2008年3月重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院呼吸科病房因ALRTI住院兒童住院當(dāng)日的鼻咽吸取物(nasopharyngeal aspirate,NPA)878份,采用熒光定量PCR(real-time PCR)方法檢測(cè)hMPV基因組RNA,傳統(tǒng)PCR方法擴(kuò)增hMPV陽(yáng)性標(biāo)本的F基因進(jìn)一步確定hMPV感染,擴(kuò)增G基因用于遺傳進(jìn)化分析。同時(shí)采用傳統(tǒng)PCR方法檢測(cè)呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)和冠狀病毒NL-63(human coronavirus NL-63,HCoV-NL6),直接免疫熒光法(direct immunofluorescence assay,DFA)檢測(cè)流感病毒A、B亞型、副流感病毒1、2、3型及腺病毒,明確有無(wú)上述常見(jiàn)呼吸道病毒協(xié)同感染。 結(jié)果:采用real-time PCR的方法從878份標(biāo)本中檢測(cè)出227份hMPV陽(yáng)性,陽(yáng)性率為25.9%。HMPV全年散發(fā),好發(fā)季節(jié)為冬春季,感染人群主要為2歲以內(nèi)兒童,尤其是6個(gè)月以下小嬰兒。HMPV感染流行病學(xué)特點(diǎn)和臨床特征與RSV相似,與喘息性疾病的發(fā)生相關(guān)。HMPV可與常見(jiàn)呼吸道病毒協(xié)同感染,與RSV協(xié)同感染率最高。HMPV與RSV的協(xié)同感染可能導(dǎo)致疾病的重癥傾向。遺傳進(jìn)化分析顯示重慶地區(qū)hMPV A和B兩個(gè)基因型均流行,研究周期內(nèi)以A2亞型為優(yōu)勢(shì)株。 結(jié)論:HMPV是重慶地區(qū)急性下呼吸道感染住院兒童重要的呼吸道病毒病原之一,其感染對(duì)6個(gè)月以下小嬰兒威脅最大。 PART II:哮喘小鼠病毒感染動(dòng)物模型的建立 目的:建立BALB/c哮喘小鼠hMPV/RSV病毒感染的動(dòng)物模型。 方法:哮喘模型判定:清潔級(jí)雌性BALB/c小鼠16只,隨機(jī)分為對(duì)照組和OVA組。OVA組在第1d、第14d用OVA致敏,第28-30d用OVA霧化激發(fā),對(duì)照組采用PBS致敏激發(fā),第31d檢測(cè)小鼠氣道高反應(yīng)性(airway hyperreactivity,AHR)、血清中抗OVA-IgE的濃度、支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中IFN-γ和IL-4的濃度、BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)以及肺組織病理變化。哮喘動(dòng)物病毒感染模型判定:清潔級(jí)雌性BALB/c小鼠48只,隨機(jī)分為OVA/hMPV組和OVA/RSV組。在第1d、第14d用OVA致敏,第28-37d用OVA霧化激發(fā),第30d霧化后經(jīng)腹腔麻醉,OVA/hMPV組鼻腔滴入滴度為1O7.0 TCID50/ml hMPV病毒液,OVA/RSV組鼻腔滴入滴度為1O7.0 TCID50/ml RSV病毒液,感染后3d(第33d)、5d(第35d)、7天(第37d)處死小鼠,檢測(cè)有無(wú)hMPV/RSV感染。 結(jié)果:哮喘模型:OVA組小鼠在霧化過(guò)程中出現(xiàn)哮喘急性發(fā)作的癥狀;小鼠肺功能儀檢測(cè)存在AHR;血清抗OVA-IgE檢測(cè)水平明顯升高;BALF中IFN-γ降低和IL-4升高;BALF中細(xì)胞總數(shù)明顯增多,表現(xiàn)為以淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主的炎癥改變。肺組織病理切片表現(xiàn)為支氣管細(xì)支氣管及伴行血管周圍大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),肺間質(zhì)及肺泡腔內(nèi)可見(jiàn)嗜酸性粒細(xì)胞,以上結(jié)果均提示哮喘模型建立成功。哮喘動(dòng)物病毒感染模型:哮喘小鼠感染病毒(hMPV/RSV)后,出現(xiàn)明顯體重降低和行為學(xué)異常。將感染后3d、5d、7d的小鼠肺組織接種細(xì)胞,可以觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞出現(xiàn)明顯細(xì)胞病變(cytopathic effects,CPE);肺組織提RNA,作RT-PCR,均能擴(kuò)增出相應(yīng)的目的條帶;免疫熒光法檢測(cè)小鼠肺組織接種的Vero-E6細(xì)胞/Hep-2細(xì)胞發(fā)現(xiàn),細(xì)胞胞漿出現(xiàn)綠色熒光,以上結(jié)果均提示hMPV/RSV病毒感染動(dòng)物模型建立成功。 結(jié)論:成功建立BALB/c哮喘小鼠hMPV/RSV病毒感染的動(dòng)物模型,有助于后續(xù)研究。 PART III:人偏肺病毒、呼吸道合胞病毒感染與哮喘發(fā)作的關(guān)系 目的:了解BALB/c哮喘小鼠感染hMPV/RSV后氣道反應(yīng)性和免疫反應(yīng)變化情況,初步闡明上述病毒感染與哮喘小鼠氣道炎癥的關(guān)系。 方法:清潔級(jí)雌性BALB/c小鼠96只,隨機(jī)分為4組。OVA組:第1d、第14d OVA致敏,第28-37d OVA激發(fā),第30d PBS滴鼻。對(duì)照組采用PBS致敏激發(fā)。OVA/hMPV組致敏激發(fā)同OVA組,第30d滴入滴度為1O7.0 TCID50/ml hMPV病毒液。OVA/RSV組致敏激發(fā)同OVA組,第30d滴入滴度為1O7.0 TCID50/ml RSV病毒液。第33d、35d、37d處死小鼠,每次每組8只小鼠。小鼠感染后每日檢測(cè)體重變化和疾病評(píng)分;感染后3d、5d、7d檢測(cè)小鼠氣道反應(yīng)性、BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)、BALF中細(xì)胞因子水平、肺組織病理改變以及T細(xì)胞亞群分布。 結(jié)果:哮喘小鼠感染hMPV/RSV后,疾病嚴(yán)重度(疾病評(píng)分、體重改變、AHR、BALF中細(xì)胞數(shù)量、病理改變)、炎癥因子(IFN-γ和IL-4)、胞內(nèi)細(xì)胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-17和Foxp3)均較OVA組改變明顯。HMPV感染比RSV感染誘導(dǎo)更弱的IFN-γ反應(yīng);早期病理改變更嚴(yán)重。在感染早期,hMPV和RSV感染可以誘導(dǎo)Th17和Treg反應(yīng)的增強(qiáng);在感染中后期,hMPV和RSV感染可以誘導(dǎo)Th1和Th2型反應(yīng)的增強(qiáng)。HMPV感染比RSV感染誘導(dǎo)的Treg反應(yīng)更強(qiáng),Th1、Th2和Th17反應(yīng)更弱。 結(jié)論:hMPV/RSV病毒感染可以誘導(dǎo)哮喘小鼠哮喘加劇;與RSV感染相比,hMPV感染早期的病理學(xué)改變更嚴(yán)重, Treg反應(yīng)更強(qiáng),Th1、Th2和Th17反應(yīng)更弱。
[Abstract]:Study on Molecular Epidemiology of Human Partial Lung Virus Infection Based on Hospital for Children in Chongqing



Objective : To investigate the molecular epidemiological features and clinical characteristics of acute lower respiratory tract infection ( ALRTI ) in hospitalized children with acute lower respiratory tract infection ( ALRTI ) .



Methods : In April 2006 to March 2008 , 878 samples of nasopharyngeal aspirant ( NPA ) were collected from respiratory ward of Affiliated Children ' s Hospital of Chongqing Medical University .



Results : A total of 227 samples were detected from 878 samples by real - time PCR . The positive rate was 25 . 9 % . The positive rate was 25 . 9 % . During the whole year , the positive rate was 25 . 9 % .



Conclusion : Hmpv is one of the most important respiratory viruses in hospitalized children with acute lower respiratory tract infection in Chongqing .



PART II : Establishment of Animal Model of Viral Infection in Asthma Mice



Objective : To establish an animal model for the viral infection in BALB / c asthmatic mice .



Methods : Sixteen healthy female BALB / c mice were randomly divided into control group and OVA group .



Results : The asthma model : OVA group mice had the symptoms of acute asthma attack during the atomization process ; the serum anti - OVA - IgE level was significantly higher than that in BALF ; the number of cells in BALF increased significantly , and the number of cells in BALF increased significantly .



Conclusion : The animal model of BALB / c asthmatic mice is successfully established , which is helpful for the follow - up study .



PART III : THE RELATIONSHIP BETWEEN HUMAN FEVER VIRUS , Respiratory Syncytial Virus Infection and Asthma



Objective : To investigate the changes of airway reactivity and immune response in BALB / c asthmatic mice infected with hPV / RSV , and preliminarily clarify the relationship between the above - mentioned viral infection and airway inflammation in asthmatic mice .



Methods : 96 healthy female BALB / c mice were randomly divided into four groups : OVA group : day 1d , day 14 OVA sensitization , 28 - 37d OVA challenge , day 30d PBS nasal drops . The control group was sensitized by PBS . After infection , the mice were sensitized and challenged daily .



Results : The severity of disease ( disease score , body weight change , AHR , number of cells in BALF , pathological changes ) , inflammatory factor ( IFN - 緯 and IL - 4 ) , intracellular cytokine ( IFN - 緯 , IL - 4 , IL - 17 and Foxp3 ) were significantly higher than those in OVA group .



Conclusion : The results showed that the virus could induce asthma in asthmatic mice . Compared with RSV infection , the pathological changes in early stage were more serious , Treg reaction was stronger , Th1 , Th2 and Th17 responses were weaker .

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R181.3;R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1862216