本文選題：鄰苯二甲醛(OPA)　切入點(diǎn)：MS2噬菌體　出處：《四川大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的： 為MS2噬菌體替代脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ型疫苗株(PV-Ⅰ)做腸道病毒的指示病毒用于消毒效果評價提供進(jìn)一步理論和實(shí)驗(yàn)室證據(jù)，實(shí)驗(yàn)觀察新型消毒劑鄰苯二甲醛(OPA)對MS2噬菌體的滅活作用及滅活機(jī)理。 方法： 本文分為兩個部分，分述如下： 第一部分MS2噬菌體對鄰苯二甲醛(OPA)的抵抗力及其部分生物學(xué)特性的初步研究，包括： 1、MS2噬菌體遺傳穩(wěn)定性研究：對MS2噬菌體進(jìn)行連續(xù)傳代培養(yǎng)20代，試驗(yàn)觀察0代、5代、10代、15代、20代噬菌體對消毒劑OPA的抵抗力是否有差異。 2、MS2噬菌體最佳保存方法研究：在10％甘油、PBS保存介質(zhì)中，4℃、22℃、-20℃、-70℃保存150天，雙層瓊脂法測定噬菌體效價，對存活力進(jìn)行分析比較。 3、MS2噬菌體在不同水體中存活力：用加標(biāo)的方法觀察MS2噬菌體在醫(yī)院污水、自來水、超純水、湖水、生活污水、工業(yè)污水、海水中的消亡情況。 4、MS2噬菌體對OPA的抵抗力研究：參照我國衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》(2002年版)懸液定量殺滅試驗(yàn)觀察消毒劑OPA對MS2噬菌體的滅活作用。 第二部分鄰苯二甲醛(OPA)對MS2噬菌體滅活機(jī)理的初步研究，包括： 1、鄰苯二甲醛對MS2噬菌體結(jié)構(gòu)蛋白的影響：選用1％磷鎢酸負(fù)染透射電鏡技術(shù)和血清中和試驗(yàn)來觀察消毒劑OPA作用后對MS2噬菌體結(jié)構(gòu)、吸附性及抗原性的影響。 2、鄰苯二甲醛對MS2噬菌體核酸的影響：使用prime premier 5．0軟件，，以GenBank NC_001417(MS2全基因序列)為模板設(shè)計(jì)引物，設(shè)計(jì)了RNA特異性反轉(zhuǎn)錄下游引物和針對四種基因的特異性引物，提取噬菌體RNA，通過RT-PCR，對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分析判斷，觀察消毒劑OPA作用后對MS2噬菌體四個基因的影響。 結(jié)果： 第一部分MS2噬菌體對鄰苯二甲醛(OPA)的抵抗力及其部分生物學(xué)特性的初步研究： 1、MS2噬菌體遺傳穩(wěn)定性研究：相同作用條件下，0、5、10、15、20代之間的滅活對數(shù)值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。即在相同作用條件下各代MS2噬菌體對消毒劑OPA的抵抗力沒有差異。MS2噬菌體經(jīng)過20代傳代，對消毒劑OPA抵抗力方面的遺傳穩(wěn)定性保持較好。 2、MS2噬菌體最佳保存方法研究：用10％甘油、PBS保存介質(zhì)中，4℃、22℃、-20℃、-70℃保存150天，MS2噬菌體沒有數(shù)量級上的變化，消亡對數(shù)值均小于1，無明顯差異。在不同保存液中，包括10％甘油、PBS、超純水和營養(yǎng)肉湯中，MS2噬菌體均保持很好的穩(wěn)定性。相同介質(zhì)保存，4℃條件比其它溫度較優(yōu)，室溫、-20℃、-70℃保存效果相似。4℃保存不需要特殊儀器，且條件最簡單，操作最方便，是噬菌體保存的好方法。 3、MS2噬菌體在不同水體中存活力：從生活污水、工業(yè)污水、海水中分離到了能侵襲埃希氏大腸桿菌ATCC15597的噬菌體，噬菌體噬斑大小形態(tài)不一。加標(biāo)噬菌體在各種水體中，室溫條件下比4℃條件下噬菌體消亡更快。在相同保存溫度下(4℃和室溫)，加標(biāo)MS2噬菌體在超純水和自來水中穩(wěn)定性較其它水體好。 4、MS2噬菌體對OPA的抵抗力研究：用1500mg／L、2000mg／L、2500mg／L的OPA與MS2噬菌體分別作用3min、2min、1min達(dá)到消毒水平；消毒劑OPA對MS2噬菌體的滅活作用中時間因素所起的作用大于濃度因素，表現(xiàn)出快速高效的殺滅特征。 第二部分鄰苯二甲醛(OPA)對MS2噬菌體滅活機(jī)理的初步研究： 1、OPA對MS2噬菌體結(jié)構(gòu)蛋白的影響：電鏡下很容易觀察到MS2噬菌體、它的宿主菌及它們的吸附現(xiàn)象。500mg／L和5000mg／L的OPA與MS2噬菌體分別作用3min、0．5min后，MS2噬菌體顆粒基本被破壞掉，與宿主菌的吸附能力也基本喪失。即提示低濃度和高濃度消毒劑OPA對MS2噬菌體滅活后A蛋白被破壞。500mg／L、1000mg／L、5000mg／L的OPA與MS2噬菌體分別作用3min、0．5min、0．5min，再將抗血清與活的MS2噬菌體作用，MS2噬菌體的存活率降低，表明三個濃度水平的消毒劑OPA滅活的MS2噬菌體的抗原性被破壞。即提示三個濃度水平的消毒劑OPA滅活的MS2噬菌體的外殼蛋白破壞。 2、OPA對MS2噬菌體核酸的影響：消毒劑OPA作用以后，MS2噬菌體的四個基因均未擴(kuò)增出，500mg／L消毒劑OPA作用MS2噬菌體3min和5000mg／L作用0．5min后，MS2噬菌體四個基因(A蛋白基因、衣殼蛋白基因、裂解蛋白基因和復(fù)制酶蛋白基因)均被破壞。 結(jié)論： MS2噬菌體對OPA抵抗性方面的遺傳穩(wěn)定性保持較好；4℃保存是噬菌體保存的好方法；MS2噬菌體在超純水和自來水中穩(wěn)定性較其它水體好；OPA對MS2噬菌體表現(xiàn)出快速高效的殺滅特征。OPA滅活MS2噬菌體后，其四個基因(A蛋白基因、衣殼蛋白基因、裂解蛋白基因和復(fù)制酶蛋白基因)均被破壞，MS2噬菌體顆�；颈黄茐牡簦c宿主菌的吸附能力也基本喪失，抗原性也消失了。
[Abstract]:Objective:
MS2 phage instead of poliovirus type vaccine strain (PV- 1) as indicator virus used to provide further theoretical and experimental evidence for evaluating the effect of disinfection, experimental observation of new disinfectant phthalate two formaldehyde (OPA) of MS2 phage inactivation and inactivation mechanism.
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本文編號：1587781