本文關(guān)鍵詞：靜電紡纖維負載共培養(yǎng)細胞膜片構(gòu)建組織工程關(guān)節(jié)盤的實驗研究

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【摘要】：實驗?zāi)康?建立PLGA靜電紡絲支架負載共培養(yǎng)顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞與滑膜干細胞細胞膜片的實驗?zāi)Ｐ?探討此模型中組織工程三要素間的相互作用關(guān)系,為重建顳下頜關(guān)節(jié)盤提供新思路。實驗方法:本實驗將兔滑膜干細胞與兔顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞以0:1、1:1、1:0比例培養(yǎng),利用Vc誘導(dǎo)成細胞膜片,并將細胞膜片與PLGA靜電紡纖維以類似“三明治”的形式負載,分別在不含TGF-β(0ng/ml)(非誘導(dǎo)組)與含TGF-β(10ng/ml)(誘導(dǎo)組)的成軟骨誘導(dǎo)液中培養(yǎng)14天后,收集樣品,PicogreenDNA定量分析誘導(dǎo)后細胞數(shù)目,DMMB法檢測細胞外基質(zhì)中糖胺聚糖分泌水平,免疫熒光染色檢測II型膠原分泌水平及RT-PCR檢測成軟骨分化相關(guān)基因(Col1a1,Col2a1,Sox-9,Runx-2)的表達水平;實驗結(jié)果:誘導(dǎo)組GAG沉積量顯著高于非誘導(dǎo)組(P0.01),共培養(yǎng)組GAG/DNA接近顳下頜關(guān)節(jié)盤組水平(P0.05)。免疫熒光顯示,II型膠原的分泌在誘導(dǎo)組中也明顯高于非誘導(dǎo)組。RT-PCR結(jié)果表明經(jīng)TGF-β誘導(dǎo)后,單獨培養(yǎng)組成軟骨分化相關(guān)基因(Col2a1,Sox-9)的表達水平均增高(P0.01)。而共培養(yǎng)組SOX9表達水平表現(xiàn)為降低(P0.01),Col2a1表達水平卻表現(xiàn)為升高(P0.01)。實驗結(jié)論:PLGA靜電紡絲支架負載共培養(yǎng)細胞膜片模型可形成具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的類軟骨組織,在TGF-β作用下表現(xiàn)出明顯的軟骨細胞表型,細胞外基質(zhì)水平也有上調(diào),但其作用機理仍需進一步研究。
【關(guān)鍵詞】：顳下頜關(guān)節(jié)盤 細胞膜片 共培養(yǎng) 靜電紡絲 組織工程
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R782.6
【目錄】：

• 摘要4-5
• Absrract5-7
• 英文縮略詞表7-10
• 第1章 引言10-15
• 1.1 組織細胞來源及共培養(yǎng)模式11-12
• 1.2 支架材料12-13
• 1.3 生長因子13-15
• 第2章 正文15-33
• 2.1 實驗材料15-17
• 2.1.1 實驗動物15
• 2.1.2 主要儀器與設(shè)備15-16
• 2.1.3 實驗試劑表16
• 2.1.4 實驗試劑的配制16-17
• 2.2 實驗方法17-22
• 2.2.1 兔來源滑膜間充質(zhì)干細胞的分離和培養(yǎng)17-18
• 2.2.2 兔來源顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞的分離和培養(yǎng)18-19
• 2.2.3 PLGA電紡支架制備19
• 2.2.4 SEM觀察PLGA電紡支架19
• 2.2.5 細胞膜片的制備19
• 2.2.6 細胞膜片與靜電紡絲PLGA纖維膜負載19-20
• 2.2.7 DMMB染色法定量檢測GAG20-21
• 2.2.8 免疫熒光染色21
• 2.2.9 實時定量RT-PCR21-22
• 2.2.10 統(tǒng)計學分析22
• 2.3 實驗結(jié)果與分析22-27
• 2.3.1 細胞形態(tài)特點22-23
• 2.3.2 靜電紡纖維特點23
• 2.3.3 各組組織樣品大體觀察23-24
• 2.3.4 GAG定量24-25
• 2.3.5 免疫熒光結(jié)果25-26
• 2.3.6 RT-PCR結(jié)果26-27
• 2.4 討論27-33
• 2.4.1 關(guān)于細胞膜片的討論27-28
• 2.4.2 關(guān)于濕性靜電紡絲支架的討論28-29
• 2.4.3 關(guān)于共培養(yǎng)模式和生長因子的討論29-33
• 第3章 結(jié)論33-34
• 參考文獻34-40
• 作者簡介40-41
• 致謝41-42

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本文編號：995245