目的:研究Klotho在人舌鱗癌Cal27細(xì)胞中潛在的作用及相關(guān)機(jī)制方法:1.人舌鱗癌Cal27和SCC-9細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)、傳代、凍存、復(fù)蘇等。2.蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western Blot,WB）檢測人舌鱗癌細(xì)胞——Cal27細(xì)胞和SCC-9細(xì)胞中相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,如Klotho蛋白、β-鏈蛋白（β-catenin）、c-Myc蛋白和細(xì)胞周期蛋白D1（Cyclin D1）等。3.構(gòu)建能夠高表達(dá)Klotho蛋白的重組質(zhì)粒,使得重組質(zhì)粒具有一定的功能,能夠在細(xì)胞中高水平表達(dá)Klotho蛋白。4.使用轉(zhuǎn)染技術(shù)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入到細(xì)胞內(nèi),使其能夠順利進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)并行使功能,且細(xì)胞依然存活,最終使得細(xì)胞能夠高水平表達(dá)Klotho蛋白。5.細(xì)胞MTT（噻唑藍(lán)）檢測法（MTT比色法）檢測Cal27細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后不同時(shí)間點(diǎn)的增殖能力。6.平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測Cal27細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)后的克隆形成能力以及增殖能力。7.流式細(xì)胞術(shù)（FACS）檢測不同組Cal27細(xì)胞的凋亡率。結(jié)果:1.MTT實(shí)驗(yàn)中,Klotho過表達(dá)組的細(xì)胞增殖能力要低于對照組與空載組（p<0.05）。2.Klotho過表達(dá)組的克隆數(shù)明... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

蛋白質(zhì)印跡法檢測兩種舌鱗癌細(xì)胞系中的Klotho表達(dá)水平

各組Cal27細(xì)胞增殖能力

克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果


本文編號：3555438