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脂肪干細(xì)胞向成牙骨質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)分化的體外實驗研究

發(fā)布時間:2021-06-30 09:05
  研究背景牙骨質(zhì)是牙根表面一薄層礦化組織,在牙齒發(fā)育過程中牙骨質(zhì)基質(zhì)由成牙骨質(zhì)細(xì)胞分泌而形成的。牙骨質(zhì)是牙齒賴以穩(wěn)定在牙槽窩內(nèi)的重要組織結(jié)構(gòu)之一,在維持牙齒的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和生理功能中發(fā)揮重要作用。然而,牙骨質(zhì)的再生往往比較困難的,主要是因為牙骨質(zhì)中的成牙骨細(xì)胞量很少,體外分離培養(yǎng)更加不易。盡管學(xué)者們對該領(lǐng)域進行了大量研究,對于成牙骨質(zhì)細(xì)胞的獲得,仍局限于牙源性細(xì)胞,如牙囊細(xì)胞、牙胚來源的上皮根鞘細(xì)胞、牙周膜干細(xì)胞和頜突間充質(zhì)細(xì)胞等,而這些種子細(xì)胞都存在取材受限的缺點。因此,成牙骨質(zhì)細(xì)胞的來源問題在很大程度上制約了組織工程化牙骨質(zhì)和牙周組織再生的發(fā)展。脂肪干細(xì)胞(Adipose tissue-derived stem cells: ADSCs)由于儲備豐富、取材容易、自我增殖和多向分化潛能強等優(yōu)點,在再生醫(yī)學(xué)中引起許多學(xué)者的關(guān)注。研究顯示,在不同的體外培養(yǎng)環(huán)境中,ADSCs可以向成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、心肌細(xì)胞、甚至上皮細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞分化,特別是向成骨細(xì)胞分化,體外誘導(dǎo)技術(shù)比較成熟。成牙骨質(zhì)細(xì)胞與成骨細(xì)胞在形態(tài)、表型、礦化能力等方面有著諸多相似之處,包括ALP活性、Runx2、I型膠原(Col... 

【文章來源】:中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】:119 頁

【學(xué)位級別】:博士

【部分圖文】:

脂肪干細(xì)胞向成牙骨質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)分化的體外實驗研究


原代ADSCs培養(yǎng)4天(100×)

胰酶,旋渦狀,凍存,細(xì)胞


核大 (圖 1-3)。原代細(xì)胞經(jīng) 0.25%胰酶(含 0.01%卷起,脫離瓶底壁變圓。ADSCs 傳代后 24 h 貼滿,倒置顯微鏡下觀察,細(xì)胞仍呈長梭形,中間,細(xì)胞呈放旋渦狀分布。凍存 ADSCs 復(fù)蘇后細(xì)SCs 培養(yǎng) 48 h(100×) 圖 1-2 原代 ADSC

生長曲線,免疫細(xì)胞化學(xué)法,陰性,檢測結(jié)果


圖 1-4 SD 大鼠 ADSCs 的生長曲線三、ADSCs 來源鑒定免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測,ADSCs 胞漿中 Vimentin 染色呈強陽性,而 CK 染色呈陰性(圖 1-5),表明 ADSCs 高表達(dá) Vimentin,不表達(dá) CK,提示 ADSCs 來源于中胚層。流式細(xì)胞分析結(jié)果為:ADSCs 中 CD29,CD44,CD90,CD105 的檢出率很高,分別是93.09%、75.11%、90.20%、95.86%,STRO-1 的檢出率為 30.09%,顯示 ADSCs 較高的間充質(zhì)來源特征,并具有較好的干細(xì)胞特性(圖 1-6)。胞數(shù)細(xì)02410 12 32 43 54 65 7 6 87 9 8 109 天

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]Multilineage Differentiation of Dental Pulp Stem Cells from Green Fluorescent Protein Transgenic Mice[J]. Brian E.Grottkau,P.Prasad Purudappa.  International Journal of Oral Science. 2010(01)

博士論文
[1]利用牙囊細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程牙周樣結(jié)構(gòu)的研究[D]. 武俊杰.第四軍醫(yī)大學(xué) 2008



本文編號:3257458

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