骨組織最容易受周圍力學(xué)環(huán)境變化的影響，從而在形態(tài)結(jié)構(gòu)和骨量上發(fā)生改變。適宜的機(jī)械刺激可抑制骨吸收并增加骨的生成。研究表明有許多離子通道與細(xì)胞的成骨分化有關(guān)，如Ca2+、K+等，但作為體內(nèi)最主要的陰離子通道——氯通道，其作用還知之甚少。ClC-3為電壓門控氯通道之一，早先被定義為容積敏感氯通道；近年研究表明ClC-3的作用不僅僅局限于細(xì)胞容積調(diào)控，它與細(xì)胞增殖、凋亡、破骨細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)酸化調(diào)節(jié)等相關(guān)。成骨細(xì)胞在力學(xué)刺激下，伴隨細(xì)胞容積的變化，是否是ClC-3介導(dǎo)了這種變化還不清楚。本研究通過(guò)細(xì)胞體外培養(yǎng)、體外加力實(shí)驗(yàn)、siRNA等技術(shù)探討ClC-3作為力學(xué)刺激敏感氯通道的可能性。ClC型氯通道是一個(gè)基因家族，是電壓門控氯通道。其中，ClC-3、ClC-4和ClC-5由于其基因序列相似而成為一個(gè)主要分支，為內(nèi)體系統(tǒng)氯通道。近年許多研究發(fā)現(xiàn)， ClC-3氯通道可能與細(xì)胞的成骨分化有關(guān)。本研究通過(guò)自行研制的加力裝置，對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠成骨樣細(xì)胞系MC3T3-E1進(jìn)行持續(xù)性靜壓力刺激，成功建立了體外加壓模型。通過(guò)倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，并用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)其受壓力后相關(guān)成骨因子和細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)成骨... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

ClC型氯離子通道的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)

成骨細(xì)胞呈多角樣、不規(guī)則形，排列也無(wú)明顯規(guī)則（圖2）；1atm 壓力條件下培養(yǎng) 8h 時(shí)，細(xì)胞形態(tài)與對(duì)照組相比無(wú)明顯改變，只是密度降低，有少部分細(xì)胞死亡，細(xì)胞單個(gè)分布，形態(tài)多樣，邊緣清晰（圖 3）。對(duì)照組常規(guī)培養(yǎng) 24h 時(shí)，與同組培養(yǎng) 8h 相比細(xì)胞增殖明顯，細(xì)胞形態(tài)呈多邊形，分布均勻、排列緊密（圖 4）；1atm 壓力條件下培養(yǎng) 24h 時(shí)，細(xì)胞密度雖較同組培養(yǎng) 8h 有所增加，但仍低于同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組，且細(xì)胞形態(tài)呈梭形，多以突起相互連接（圖 5）。Bars=50μm3.2 壓力刺激對(duì)細(xì)胞成骨相關(guān)因子 mRNA 表達(dá)的影響小鼠成骨細(xì)胞系 MC3T3-E1，在 1atm 加壓條件下分別培養(yǎng) 8h、24h 后，一些成骨相關(guān)基因表達(dá)有增強(qiáng)，顯著高于對(duì)照組。可以看到，在 8h 后表達(dá)量明顯升高

加壓組8h

【參考文獻(xiàn)】：
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