人牙周膜細(xì)胞（human periodontal ligament cells,hPDLCs）是牙周組織的主要細(xì)胞成分,含有不同分化方向和階段的異質(zhì)性細(xì)胞群體,有合成膠原,吞噬經(jīng)酶降解的陳舊膠原纖維,形成牙骨質(zhì)等作用,對牙周組織起作修復(fù)和保護(hù)的作用,也是牙周組織再生的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。研究表明[1-3]低強(qiáng)度脈沖超聲（low intensity pulsed ultrasound ,LIPUS）的刺激可引起細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)變化,改變K⁺等離子的通透性、激活第二信使、影響細(xì)胞因子的表達(dá),從而引起骨折愈合的鏈?zhǔn)椒磻?yīng);可以促進(jìn)局部血流及淋巴的循環(huán),促進(jìn)生長因子等骨折愈合關(guān)鍵物質(zhì)如細(xì)胞活素等的運(yùn)輸加強(qiáng),刺激細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)合成。p38MAPK是MAPK家族的重要成員之一,近年來研究發(fā)現(xiàn)p38MAPK在骨的代謝中也發(fā)揮著重要的作用。PDLCs與成骨細(xì)胞具有一定的相似性,我們推測p38MAPK可能參與了PDLCs的分化調(diào)控,同時推測p38MAPK也可能參與了LIPUS誘導(dǎo)的PDLCs成骨分化。因此,本研究在p38MAPK在LIPUS誘導(dǎo)hPDLCs成骨分化的作用機(jī)制的探討具有重要意義... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

hPDLCs原代培養(yǎng)細(xì)胞爬出（×200）

10) 用 75％、85％、95％酒精 1 次，無水乙醇 2 次進(jìn)行梯度脫水，每次 1min；二甲苯透明；甘油封片，顯微鏡下觀察染色情況并拍照進(jìn)行記錄。2 結(jié)果2.1 體外培養(yǎng)的 hPDLCs 形態(tài)學(xué)及生化特性表現(xiàn)組織塊法進(jìn)行原代培養(yǎng) 7-10 天，可見細(xì)胞從組織塊中爬出并以組織塊為中心呈放射狀排列，形成生長暈（圖 1.1）；若組織塊培養(yǎng) 20 天仍未見細(xì)胞爬出，視為無體外生長能力。原代細(xì)胞覆蓋率達(dá) 60%時進(jìn)行傳代分離，傳代后細(xì)胞均呈長梭形或星形；胞突細(xì)長且像周圍呈現(xiàn)出數(shù)個突起；胞漿豐富均勻；細(xì)胞核為圓形或?yàn)闄E圓形居中,核內(nèi)可有 2-3 個核仁；細(xì)胞間呈束狀、柵欄狀或旋渦狀排列，當(dāng)生長密集時可出現(xiàn)復(fù)層生長。（圖 1.2）

圖 1.4 波形絲蛋白染色陽性(×100)Fig1.4 Positive immunohistoclmical staining forVimentin on hPDLCs (x 100)圖 1.5 角化蛋白染色陰性(×200)Fig 1.5 Negtive immunohistochmicalstaining for Keratin on hPDLCs(×200)3 討論組織塊培養(yǎng)法是將組織小塊平鋪在培養(yǎng)瓶的底部，細(xì)胞自行從組織邊緣游出，從而獲得取原代細(xì)胞的方法。組織塊培養(yǎng)法操作簡單，污染幾率相對較小，培養(yǎng)出來的細(xì)胞同源性較高；但該方法周期較長，同時貼壁率較低。馬佳音[33]等發(fā)現(xiàn)組織塊法成功率為 16.67%， 分析原因可能為：細(xì)胞不易貼壁； 細(xì)胞包裹于組織中，營養(yǎng)及穿透能力有限，出現(xiàn)代謝不佳；組織塊中的纖維成分束縛了細(xì)胞的游出； 貼壁時，培養(yǎng)液對組織塊的浸潤不足使細(xì)胞受到損傷；培養(yǎng)液中組織碎片代謝物對細(xì)胞的生長產(chǎn)生了影響。口腔屬于相對污染的環(huán)境，收集實(shí)驗(yàn)牙后應(yīng)立即

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]三種組織塊法培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞的比較研究[J]. 馬佳音,胥春,郝軼,張富強(qiáng).  組織工程與重建外科雜志. 2010(03)
[2]p38 MAPK信號傳導(dǎo)通路及其抑制劑的研究現(xiàn)狀[J]. 張頻捷,朱立新,耿小平.  安徽醫(yī)藥. 2010(05)
[3]p38MAPK抑制對成骨細(xì)胞核因子-κB受體激活配體和骨保護(hù)素表達(dá)的影響[J]. 李瑞霞,肖喜榮,顧超,徐嬿,李斌.  復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2010(01)
[4]三七總皂甙通過P38MAPK信號通路促進(jìn)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞的增殖、分化[J]. 李學(xué)東,陳斌,鄭創(chuàng)義,劉釗勇,杜世新.  中國傷殘醫(yī)學(xué). 2009(04)
[5]p38絲裂原活化蛋白激酶抑制劑研究進(jìn)展[J]. 王國軍,劉亞偉,李玉花,姜勇.  生物技術(shù)通訊. 2009(03)
[6]牙周韌帶細(xì)胞植入量與牙周組織再生量關(guān)系的動物實(shí)驗(yàn)[J]. 馬忠雄,閆福華,鐘聲.  福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2008(05)
[7]骨靈片通過p38 MAPK信號通路影響成骨細(xì)胞功能的機(jī)制[J]. 黃少慧,張娟,李娟,蔡紅兵.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2008(07)
[8]低強(qiáng)度超聲對大鼠牙槽骨改建過程中BMP-2表達(dá)的影響[J]. 薛慧,彭惠,楊東紅,王宏艷,吳立鵬.  黑龍江醫(yī)藥科學(xué). 2007(06)
[9]p38絲裂原活化蛋白激酶通路及其研究進(jìn)展[J]. 張文軍,李榮山.  醫(yī)學(xué)綜述. 2007(09)
[10]低強(qiáng)度脈沖超聲對骨折愈合中BMP-2表達(dá)的影響[J]. 潘建成,游逸豐,王大風(fēng).  浙江創(chuàng)傷外科. 2007(02)

博士論文
[1]FGFR1對破骨細(xì)胞分化成熟與骨吸收功能的調(diào)控作用及機(jī)制研究[D]. 魯秀敏.第三軍醫(yī)大學(xué) 2008
[2]TGF-β對人牙髓細(xì)胞的作用及p38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究[D]. 王鳳明.四川大學(xué) 2006

碩士論文
[1]低強(qiáng)度脈沖超聲波在Bio-Gide膜引導(dǎo)牙周組織再生術(shù)中促犬牙周病組織修復(fù)效應(yīng)的探討[D]. 柴召午.重慶醫(yī)科大學(xué) 2010
[2]低強(qiáng)度脈沖超聲波對牙周膜細(xì)胞成骨分化影響的初步研究[D]. 周潔.重慶醫(yī)科大學(xué) 2010
[3]TNF-α和PGE2對人牙周膜成纖維細(xì)胞RANKL/OPG mRNA表達(dá)的影響[D]. 任莉.第三軍醫(yī)大學(xué) 2009
[4]低強(qiáng)度脈沖超聲在Beagle犬牙槽骨及頜骨缺損模型中促進(jìn)骨質(zhì)修復(fù)的初步研究[D]. 馮格.重慶醫(yī)科大學(xué) 2008
[5]低強(qiáng)度脈沖超聲對Beagle犬牙周病組織生物學(xué)改建效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 董妮.重慶醫(yī)科大學(xué) 2008



本文編號：3004469