人牙周膜細胞（human periodontal ligament cells,hPDLCs）是牙周組織的主要細胞成分,含有不同分化方向和階段的異質(zhì)性細胞群體,有合成膠原,吞噬經(jīng)酶降解的陳舊膠原纖維,形成牙骨質(zhì)等作用,對牙周組織起作修復和保護的作用,也是牙周組織再生的細胞學基礎。研究表明[1-3]低強度脈沖超聲（low intensity pulsed ultrasound ,LIPUS）的刺激可引起細胞膜結(jié)構(gòu)變化,改變K⁺等離子的通透性、激活第二信使、影響細胞因子的表達,從而引起骨折愈合的鏈式反應;可以促進局部血流及淋巴的循環(huán),促進生長因子等骨折愈合關鍵物質(zhì)如細胞活素等的運輸加強,刺激細胞增殖及細胞外基質(zhì)合成。p38MAPK是MAPK家族的重要成員之一,近年來研究發(fā)現(xiàn)p38MAPK在骨的代謝中也發(fā)揮著重要的作用。PDLCs與成骨細胞具有一定的相似性,我們推測p38MAPK可能參與了PDLCs的分化調(diào)控,同時推測p38MAPK也可能參與了LIPUS誘導的PDLCs成骨分化。因此,本研究在p38MAPK在LIPUS誘導hPDLCs成骨分化的作用機制的探討具有重要意義... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

hPDLCs原代培養(yǎng)細胞爬出（×200）

10) 用 75％、85％、95％酒精 1 次，無水乙醇 2 次進行梯度脫水，每次 1min；二甲苯透明；甘油封片，顯微鏡下觀察染色情況并拍照進行記錄。2 結(jié)果2.1 體外培養(yǎng)的 hPDLCs 形態(tài)學及生化特性表現(xiàn)組織塊法進行原代培養(yǎng) 7-10 天，可見細胞從組織塊中爬出并以組織塊為中心呈放射狀排列，形成生長暈（圖 1.1）；若組織塊培養(yǎng) 20 天仍未見細胞爬出，視為無體外生長能力。原代細胞覆蓋率達 60%時進行傳代分離，傳代后細胞均呈長梭形或星形；胞突細長且像周圍呈現(xiàn)出數(shù)個突起；胞漿豐富均勻；細胞核為圓形或為橢圓形居中,核內(nèi)可有 2-3 個核仁；細胞間呈束狀、柵欄狀或旋渦狀排列，當生長密集時可出現(xiàn)復層生長。（圖 1.2）

圖 1.4 波形絲蛋白染色陽性(×100)Fig1.4 Positive immunohistoclmical staining forVimentin on hPDLCs (x 100)圖 1.5 角化蛋白染色陰性(×200)Fig 1.5 Negtive immunohistochmicalstaining for Keratin on hPDLCs(×200)3 討論組織塊培養(yǎng)法是將組織小塊平鋪在培養(yǎng)瓶的底部，細胞自行從組織邊緣游出，從而獲得取原代細胞的方法。組織塊培養(yǎng)法操作簡單，污染幾率相對較小，培養(yǎng)出來的細胞同源性較高；但該方法周期較長，同時貼壁率較低。馬佳音[33]等發(fā)現(xiàn)組織塊法成功率為 16.67%， 分析原因可能為：細胞不易貼壁； 細胞包裹于組織中，營養(yǎng)及穿透能力有限，出現(xiàn)代謝不佳；組織塊中的纖維成分束縛了細胞的游出； 貼壁時，培養(yǎng)液對組織塊的浸潤不足使細胞受到損傷；培養(yǎng)液中組織碎片代謝物對細胞的生長產(chǎn)生了影響�？谇粚儆谙鄬ξ廴镜沫h(huán)境，收集實驗牙后應立即

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[2]低強度脈沖超聲波對牙周膜細胞成骨分化影響的初步研究[D]. 周潔.重慶醫(yī)科大學 2010
[3]TNF-α和PGE2對人牙周膜成纖維細胞RANKL/OPG mRNA表達的影響[D]. 任莉.第三軍醫(yī)大學 2009
[4]低強度脈沖超聲在Beagle犬牙槽骨及頜骨缺損模型中促進骨質(zhì)修復的初步研究[D]. 馮格.重慶醫(yī)科大學 2008
[5]低強度脈沖超聲對Beagle犬牙周病組織生物學改建效應的實驗研究[D]. 董妮.重慶醫(yī)科大學 2008



本文編號：3004469