正畸牙移動是在機械力作用下,牙周組織在一定時期內(nèi)產(chǎn)生一種在生理限度內(nèi)的組織改變,從而使牙齒朝著預定的方向進行移動。牙周膜細胞位于牙槽骨和牙齒之間,是機械力的直接效應(yīng)細胞;因此,機械力無疑是啟動牙周膜細胞生理反應(yīng),導致正畸牙齒移動的前提和關(guān)鍵。已有研究表明,體內(nèi)、外牙周膜細胞都可以表達破骨細胞分化因子(Osteoclast Differentiation Factor, ODF)和破骨細胞發(fā)生抑制因子(Osteoclasto-genesis Inhibitory Factor, OCIF),而ODF、OCIF是骨微環(huán)境內(nèi)調(diào)節(jié)破骨細胞征集和功能的關(guān)鍵因子;在破骨細胞發(fā)育成熟的過程中,在各種骨吸收刺激因子作用下,ODF表達升高,通過與破骨細胞前體細胞膜上NF-_κβ受體激活物(RANK)的直接結(jié)合將信號傳入,引起級聯(lián)反應(yīng),從而使破骨細胞分化成熟和激活;OCIF可競爭性與ODF結(jié)合,封閉ODF與RANK的結(jié)合,從而抑制破骨細胞的分化與成熟。破骨細胞的骨吸收作用是牙齒移動的第一步,通過牙槽骨的交替吸收和增生使牙齒發(fā)生定向移動,從而實現(xiàn)正畸矯治的目的。但有關(guān)機械力作用下牙周組織改建的分子生物學機制至今人們還尚未完全清楚,牙周組織是如何將機械信號轉(zhuǎn)化為生物信號,以及某些骨吸收刺激因子在此過程中作用究竟如何還需要進一步探討闡明。 第四軍醫(yī)大學博士學位論文 體外細胞培養(yǎng)及細胞力學實驗研究是目前國內(nèi)外正在興起 的研究熱點,其方法和技術(shù)正在不斷的完善和發(fā)展。本研究通過 動物實驗和體外細胞培養(yǎng),結(jié)合細胞力學實驗方法和分子生物學 檢測技術(shù),首次觀察了機械應(yīng)力及骨吸收刺激因子1,25一(0H) ZD。對組織和體外培養(yǎng)的人牙周膜細胞及大鼠骨髓破骨細胞中 ODF、OC工F表達變化情況,進一步探討牙周組織改建的分子機制, 并為臨床應(yīng)用某些外源性刺激因子來干預正畸牙周組織改建的 速度提供一條新的思路。研究內(nèi)容如下: 一牽張力作用下牙周組織ODF及OCIF表達變化的研究 目的:運用原位雜交的方法,觀察ODF及OCIF在正畸大鼠 牙周組織改建過程中張力側(cè)的表達變化,探討ODF及OCIF與正 畸牙周組織改建的關(guān)系。方法:8周齡成年健康雄性SD大鼠30 只,隨機分為對照組、牙齒移動1天組、3天組、5天組、7天組, 共5組,每組6只。在大鼠上領(lǐng)右側(cè)第一磨牙與上領(lǐng)切牙之間安 置正畸矯治器裝置,施力5飩。在相應(yīng)時間段處死實驗動物,取 材固定,進行原位雜交染色、圖像分析。結(jié)果:在牙齒移動3天 后,OC工F原位雜交染色在張力側(cè)逐漸深染,OC工F mRNA陽性細胞 數(shù)量逐漸增多,OCIF陽性表達在5天時達到最高,并可見到有新 骨形成;7天時OC工F陽性表達及分布情況與3天時相類似。張力 側(cè)牙周膜細胞、成骨細胞的ODF原位雜交染色陽性反應(yīng)隨天數(shù)的 增加有逐漸增強趨勢,并可觀察到有ODF mRNA陽性破骨細胞出 現(xiàn),但表達變化并不明顯。結(jié)論:ODF及OCIF參與了正畸牙周組 織改建過程,OCIF mRNA在張力區(qū)隨正畸牙齒移動表達升高具有 時間依賴性。 二.機械力作用下人牙周膜細胞ODF及OCIF的表達及意.義 目的:觀察周期性機械牽張力對人牙周膜細胞(HPDLC) ODF mRNA及OCIF mRNA表達的影響,探討正畸牙周組織改建的分 子機制。方法:通過體外細胞培養(yǎng)加載系統(tǒng)施于人牙周膜細胞以 第四軍醫(yī)大學博士學位論文 頻率為6周/分,彈性基底膜發(fā)生12%形變率的周期性牽張力, 利用原位雜交染色及Rl’- PCR檢測技術(shù),觀察人牙周膜細胞ODF 及OCIF mRNA表達強度的變化。結(jié)果:體外培養(yǎng)的人牙周膜細 胞在正常情況下表達ODF mRNA及OCIF mRNA。當間歇性牽張 力作用6小時、12小時及24小時后,隨著作用時間的延長,人 牙周膜細胞ODF mRNA的表達有減弱趨勢;而OCIF mRNA的 表達有增強趨勢。結(jié)論:機械牽張力可以調(diào)節(jié)人牙周膜細胞ODF、 OCIF mRNA的表達,從而可以調(diào)節(jié)骨吸收作用。ODF mRNA表 達的減弱及OCIF mRNA表達的增強提示在機械牽張力的作用 下,成骨作用有增強趨勢。 三.1{25一(OH)2D3作用下人牙周膜細胞ODF及OCIF的表達 及意義 目的:觀察1,25一(OH) ZD。對體外人牙周膜細胞(HPDLC)ODF mRNA及OCIF mRNA表達的影響,進一步探討正畸牙周組織改 建的分子機制。方法:以不同濃度的1,25一(oH)2D3(o、10一’‘,、 10一8、10一6mol/L)作用于體外培養(yǎng)的人牙周膜細胞,利用原位雜交 染色及Rl’- PCR檢測技術(shù),檢測不同濃度的1,25一(OH)2D3對體 外培養(yǎng)人牙周膜細胞ODF、OCIF mRNA表達的強度變化。結(jié)果: 隨1,25一(OH)2D3濃度的升高,人牙周膜細胞ODF mRNA的表達顯 著升高,而OCIF mRNA的表達降低。結(jié)論:1,25一(OH)2D3在體 外可影響人牙周膜細胞ODF mRNA和OC工F mRNA的表達;從而通 過調(diào)節(jié)ODF和OC工F相對含量的變化,影響牙周組織改建過程。 四.應(yīng)用1,25一(OH) 2D3體外誘導大鼠骨髓破骨細胞形成的實 驗觀察 目的:觀察1,25一(OH)2D3體外誘導大鼠骨髓細胞形成破骨 細胞的作用。方法:4周齡SD大鼠長骨骨髓細胞懸液接種于預置 蓋玻片或牙本質(zhì)片的24孔培養(yǎng)板內(nèi),試驗組加入誘導劑1,25- (0H)2D3而對照組不加,每三天換液一次,培養(yǎng)兩周。結(jié)果:培 第四軍醫(yī)大學博士學位論文 養(yǎng)一周左右光鏡下可見有多核破骨細胞形成,胞
【學位單位】:第四軍醫(yī)大學
【學位級別】:博士
【學位年份】:2004
【中圖分類】:R783.5
【部分圖文】:
第四軍醫(yī)大學博士學位論文圖1一2對照組大鼠牙周組織中OCIF表達情況(x200)圖1一33天組大鼠牙周組織中OCIF表達情況(x200)圖1一45天組大鼠牙周組織中圖1一57天組大鼠牙周組織中OCIF表達情況(x200)OCIF表達情況(x200)圖1一6對照組大鼠牙周組織中ODF表達情況(x200)

第四軍醫(yī)大學博士學位論文圖1一2對照組大鼠牙周組織中OCIF表達情況(x200)圖1一33天組大鼠牙周組織中OCIF表達情況(x200)圖1一45天組大鼠牙周組織中圖1一57天組大鼠牙周組織中OCIF表達情況(x200)OCIF表達情況(x200)圖1一6對照組大鼠牙周組織中ODF表達情況(x200)

圖1一2對照組大鼠牙周組織中OCIF表達情況(x200)圖1一33天組大鼠牙周組織中OCIF表達情況(x200)圖1一45天組大鼠牙周組織中圖1一57天組大鼠牙周組織中OCIF表達情況(x200)OCIF表達情況(x200)圖1一6對照組大鼠牙周組織中ODF表達情況(x200)
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2879470
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