失交感神經(jīng)支配對骨牽張中成骨趨化因子PDGF影響的研究

發(fā)布時間：2020-11-06 01:52

　　牽張成骨(distraction osteogenesis，DO)技術是一種在口腔頜面外科廣泛應用的骨再生技術，但其成骨的確切機制仍不明了。作為成骨細胞的主要來源，骨髓間充質干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSCs）的動員和遷移對成骨能力具有決定性的作用。然而，我們對DO過程中BMMSCs究竟如何動員并參與骨再生的機理所知甚少。交感神經(jīng)具有調節(jié)骨代謝的重要作用；本研究組在既往研究中發(fā)現(xiàn)：在骨牽張過程中，失交感神經(jīng)支配可以加速骨痂成熟速度，但交感神經(jīng)如何調控BMMSCs的動員和遷移有待深入研究。血小板衍生因子（platelet-derived growthfactor，PDGF）作為一種成骨趨化因子，在成骨細胞和血管內皮細胞均有表達，并發(fā)揮誘導BMMSCs遷移及維持BMMSCs在血管周龕穩(wěn)定性的作用。鑒于交感神經(jīng)與成骨細胞、血管內皮細胞、BMMSCs具有密切的關系，本課題擬探討交感神經(jīng)如何通過調控PDGF表達，從而影響下頜骨DO中BMMSCs動員和遷移。我們通過體內和體外模型發(fā)現(xiàn)：失交感神經(jīng)支配可上調成骨細胞PDGF表達，而下調血管內皮細胞周圍PDGF表達，同時促進BMMSCs沿PDGF的趨化遷移能力。本研究揭示了交感神經(jīng)調控下頜骨DO骨形成的干細胞機理并為臨床上改進DO技術提供理論依據(jù)。本文分為以下4個部分： 1失交感神經(jīng)支配對大鼠下頜骨牽張成骨PDGF表達的影響目的：明確失交感神經(jīng)支配下DO骨痂中不同區(qū)域PDGF表達變化。方法：成年雄性SD大鼠18只，隨機分為對照組（A組，n=9）和實驗組（B組，n=9），A組行右側牽張器植入術及下頜骨截斷術，B組行右側牽張器植入術、下頜骨截斷術及雙側頸交感干離斷術。5天延遲期后，以0.2mm/12h的速度牽張，共10d，于固定期第1天、14天及28天每組處死3只，對牽張區(qū)骨痂進行免疫組織化學染色，并用IPP6.0軟件分析平均光密度，比較A、B兩組標本骨小梁周圍及血管周圍PDGF表達情況。結果：B組骨小梁周圍PDGF表達量明顯高于A組,而血管內皮細胞周圍PDGF表達量明顯低于A組（P0.05）。結論：失交感神經(jīng)支配可上調骨小梁周圍PDGF表達，而使血管內皮細胞周圍PDGF表達下降。 2失交感神經(jīng)支配對大鼠下頜骨成骨細胞PDGF表達的影響目的：明確失交感神經(jīng)支配對體外培養(yǎng)的大鼠下頜骨成骨細胞PDGF表達的影響。方法：聯(lián)合消化法及全血貼壁法體外培養(yǎng)大鼠下頜骨BMMSCs并對其成骨、成脂分化潛能及細胞表面標志物進行鑒定。之后將BMMSCs成骨誘導10天后進行堿性磷酸酶染色，明確BMMSCs分化為成骨細胞的程度。將誘導的成骨細胞分為A組（對照組）和B組（實驗組），A組培養(yǎng)液中加入去甲腎上腺素（Noradrenaline，NE），B組常規(guī)培養(yǎng)，對細胞爬片行免疫組織化學染色，并用IPP6.0軟件分析平均光密度，比較A、B兩組細胞PDGF表達情況。結果：大鼠下頜骨BMMSCs經(jīng)成骨誘導10天后堿性磷酸酶染色為強陽性。免疫組織化學染色結果顯示，B組細胞PDGF表達量明顯高于A組（P0.05）。結論：失交感神經(jīng)支配可上調體外培養(yǎng)的大鼠下頜骨成骨細胞PDGF的表達。 3失交感神經(jīng)支配對內皮細胞PDGF表達影響目的：明確失交感神經(jīng)支配對體外培養(yǎng)的內皮細胞PDGF表達的影響。方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞系并鑒定其CD34、第Ⅷ因子表達情況。將細胞分為A組（對照組）和B組（實驗組），A組培養(yǎng)液中加入去甲腎上腺素，B組常規(guī)培養(yǎng)，對細胞爬片行免疫組織化學染色，并用IPP6.0軟件分析平均光密度，比較A、B兩組細胞PDGF表達情況。結果：體外培養(yǎng)的人臍靜脈內皮細胞系CD34、第Ⅷ因子表達均為陽性。免疫組織化學染色結果顯示，B組細胞PDGF表達量明顯低于A組（P0.05）。結論：失交感神經(jīng)支配可下調體外培養(yǎng)的內皮細胞PDGF的表達。 4失交感神經(jīng)支配對PDGF誘導下BMMSCs遷移能力的影響目的：比較相同的濃度PDGF誘導下，失交感神經(jīng)支配與交感神經(jīng)支配時BMMSCs遷移能力。方法將體外培養(yǎng)的大鼠下頜骨BMMSCs分為A組（對照組）和B組（實驗組），A組培養(yǎng)液中加入去甲腎上腺素，B組常規(guī)培養(yǎng)，在Transwell小室的上室中加入BMMSCs，下室加入不同濃度的重組大鼠PDGF-BB二聚體，計數(shù)遷移到下室的細胞數(shù)。結果：遷移到下室的MSC數(shù)目與PDGF濃度呈正性相關。相同PDGF濃度下，B組發(fā)生遷移的BMMSCs數(shù)目明顯較A組多（P0.05）。結論：失交感神經(jīng)支配能夠提高PDGF所誘導的BMMSCs遷移能力。
【學位單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2013
【中圖分類】：R782.2
【部分圖文】：

圖示解,交感干,截骨,牽張

圖 1 手術過程A 圖示固定牽張器后的截骨線；B 圖示解剖暴露的頸交感干2.3 術后處理手術完成后待大鼠蘇醒，由第四軍醫(yī)大學口腔醫(yī)院實驗動物中心統(tǒng)一飼養(yǎng)，每日清潔術區(qū)并涂抹紅霉素軟膏，給予肌注青霉素鈉 20 萬單位，1 次/日，連續(xù)注射三天預防術后感染。術后兩周給予軟食飼養(yǎng)。術后經(jīng) 5 天延遲期后進入牽張期，以0.2mm/12h 速度牽張，共牽張 10 天，隨后進入固定期。2.4 標本獲取分別于固定期 1d、14d、28d 每組處死 3 只（分別以 1、2、3 代表），取出右側下頜骨并去除骨面上附著的軟組織及多余正常骨，將牽張區(qū)新生骨痂與其兩側 2mm正常骨放入 4%多聚甲醛中固定 24 小時，10%乙二胺四乙酸二鈉脫鈣 4 周，梯度酒

牽張,實驗組,碩士學位論文,表達強度