牽張成骨(distraction osteogenesis，DO)技術(shù)是一種在口腔頜面外科廣泛應(yīng)用的骨再生技術(shù)，但其成骨的確切機(jī)制仍不明了。作為成骨細(xì)胞的主要來(lái)源，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSCs）的動(dòng)員和遷移對(duì)成骨能力具有決定性的作用。然而，我們對(duì)DO過(guò)程中BMMSCs究竟如何動(dòng)員并參與骨再生的機(jī)理所知甚少。交感神經(jīng)具有調(diào)節(jié)骨代謝的重要作用；本研究組在既往研究中發(fā)現(xiàn)：在骨牽張過(guò)程中，失交感神經(jīng)支配可以加速骨痂成熟速度，但交感神經(jīng)如何調(diào)控BMMSCs的動(dòng)員和遷移有待深入研究。血小板衍生因子（platelet-derived growthfactor，PDGF）作為一種成骨趨化因子，在成骨細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞均有表達(dá)，并發(fā)揮誘導(dǎo)BMMSCs遷移及維持BMMSCs在血管周龕穩(wěn)定性的作用。鑒于交感神經(jīng)與成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、BMMSCs具有密切的關(guān)系，本課題擬探討交感神經(jīng)如何通過(guò)調(diào)控PDGF表達(dá)，從而影響下頜骨DO中BMMSCs動(dòng)員和遷移。我們通過(guò)體內(nèi)和體外模型發(fā)現(xiàn)：失交感神經(jīng)支配可上調(diào)成骨細(xì)胞PDGF表達(dá)，而下調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞周圍PDGF表達(dá)，同時(shí)促進(jìn)BMMSCs沿PDGF的趨化遷移能力。本研究揭示了交感神經(jīng)調(diào)控下頜骨DO骨形成的干細(xì)胞機(jī)理并為臨床上改進(jìn)DO技術(shù)提供理論依據(jù)。本文分為以下4個(gè)部分： 1失交感神經(jīng)支配對(duì)大鼠下頜骨牽張成骨PDGF表達(dá)的影響 目的：明確失交感神經(jīng)支配下DO骨痂中不同區(qū)域PDGF表達(dá)變化。方法：成年雄性SD大鼠18只，隨機(jī)分為對(duì)照組（A組，n=9）和實(shí)驗(yàn)組（B組，n=9），A組行右側(cè)牽張器植入術(shù)及下頜骨截?cái)嘈g(shù)，B組行右側(cè)牽張器植入術(shù)、下頜骨截?cái)嘈g(shù)及雙側(cè)頸交感干離斷術(shù)。5天延遲期后，以0.2mm/12h的速度牽張，共10d，于固定期第1天、14天及28天每組處死3只，對(duì)牽張區(qū)骨痂進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，并用IPP6.0軟件分析平均光密度，比較A、B兩組標(biāo)本骨小梁周圍及血管周圍PDGF表達(dá)情況。結(jié)果：B組骨小梁周圍PDGF表達(dá)量明顯高于A組,而血管內(nèi)皮細(xì)胞周圍PDGF表達(dá)量明顯低于A組（P0.05）。結(jié)論：失交感神經(jīng)支配可上調(diào)骨小梁周圍PDGF表達(dá)，而使血管內(nèi)皮細(xì)胞周圍PDGF表達(dá)下降。 2失交感神經(jīng)支配對(duì)大鼠下頜骨成骨細(xì)胞PDGF表達(dá)的影響 目的：明確失交感神經(jīng)支配對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠下頜骨成骨細(xì)胞PDGF表達(dá)的影響。方法：聯(lián)合消化法及全血貼壁法體外培養(yǎng)大鼠下頜骨BMMSCs并對(duì)其成骨、成脂分化潛能及細(xì)胞表面標(biāo)志物進(jìn)行鑒定。之后將BMMSCs成骨誘導(dǎo)10天后進(jìn)行堿性磷酸酶染色，明確BMMSCs分化為成骨細(xì)胞的程度。將誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞分為A組（對(duì)照組）和B組（實(shí)驗(yàn)組），A組培養(yǎng)液中加入去甲腎上腺素（Noradrenaline，NE），B組常規(guī)培養(yǎng)，對(duì)細(xì)胞爬片行免疫組織化學(xué)染色，并用IPP6.0軟件分析平均光密度，比較A、B兩組細(xì)胞PDGF表達(dá)情況。結(jié)果：大鼠下頜骨BMMSCs經(jīng)成骨誘導(dǎo)10天后堿性磷酸酶染色為強(qiáng)陽(yáng)性。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，B組細(xì)胞PDGF表達(dá)量明顯高于A組（P0.05）。結(jié)論：失交感神經(jīng)支配可上調(diào)體外培養(yǎng)的大鼠下頜骨成骨細(xì)胞PDGF的表達(dá)。 3失交感神經(jīng)支配對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞PDGF表達(dá)影響 目的：明確失交感神經(jīng)支配對(duì)體外培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞PDGF表達(dá)的影響。方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系并鑒定其CD34、第Ⅷ因子表達(dá)情況。將細(xì)胞分為A組（對(duì)照組）和B組（實(shí)驗(yàn)組），A組培養(yǎng)液中加入去甲腎上腺素，B組常規(guī)培養(yǎng)，對(duì)細(xì)胞爬片行免疫組織化學(xué)染色，并用IPP6.0軟件分析平均光密度，比較A、B兩組細(xì)胞PDGF表達(dá)情況。結(jié)果：體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系CD34、第Ⅷ因子表達(dá)均為陽(yáng)性。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，B組細(xì)胞PDGF表達(dá)量明顯低于A組（P0.05）。結(jié)論：失交感神經(jīng)支配可下調(diào)體外培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞PDGF的表達(dá)。 4失交感神經(jīng)支配對(duì)PDGF誘導(dǎo)下BMMSCs遷移能力的影響 目的：比較相同的濃度PDGF誘導(dǎo)下，失交感神經(jīng)支配與交感神經(jīng)支配時(shí)BMMSCs遷移能力。方法將體外培養(yǎng)的大鼠下頜骨BMMSCs分為A組（對(duì)照組）和B組（實(shí)驗(yàn)組），A組培養(yǎng)液中加入去甲腎上腺素，B組常規(guī)培養(yǎng)，在Transwell小室的上室中加入BMMSCs，下室加入不同濃度的重組大鼠PDGF-BB二聚體，計(jì)數(shù)遷移到下室的細(xì)胞數(shù)。結(jié)果：遷移到下室的MSC數(shù)目與PDGF濃度呈正性相關(guān)。相同PDGF濃度下，B組發(fā)生遷移的BMMSCs數(shù)目明顯較A組多（P0.05）。結(jié)論：失交感神經(jīng)支配能夠提高PDGF所誘導(dǎo)的BMMSCs遷移能力。
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R782.2
【部分圖文】：

圖 1 手術(shù)過(guò)程A 圖示固定牽張器后的截骨線；B 圖示解剖暴露的頸交感干2.3 術(shù)后處理手術(shù)完成后待大鼠蘇醒，由第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心統(tǒng)一飼養(yǎng)，每日清潔術(shù)區(qū)并涂抹紅霉素軟膏，給予肌注青霉素鈉 20 萬(wàn)單位，1 次/日，連續(xù)注射三天預(yù)防術(shù)后感染。術(shù)后兩周給予軟食飼養(yǎng)。術(shù)后經(jīng) 5 天延遲期后進(jìn)入牽張期，以0.2mm/12h 速度牽張，共牽張 10 天，隨后進(jìn)入固定期。2.4 標(biāo)本獲取分別于固定期 1d、14d、28d 每組處死 3 只（分別以 1、2、3 代表），取出右側(cè)下頜骨并去除骨面上附著的軟組織及多余正常骨，將牽張區(qū)新生骨痂與其兩側(cè) 2mm正常骨放入 4%多聚甲醛中固定 24 小時(shí)，10%乙二胺四乙酸二鈉脫鈣 4 周，梯度酒

第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文下降的趨勢(shì)（圖 2）。經(jīng) IPP6.0 軟件分析，實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)骨小梁周圍、未成骨區(qū) PDGF表達(dá)強(qiáng)度均明顯高于對(duì)照組（P<0.05）（圖 3）。

IPP軟件分析結(jié)果
【參考文獻(xiàn)】

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1 王濤;雷德林;王磊;曹健;張雅博;杜兆杰;;失交感神經(jīng)支配對(duì)大鼠下頜骨牽張成骨影響的研究[J];創(chuàng)傷外科雜志;2011年01期

2 曹健;雷德林;王磊;杜兆杰;楊鏇凝;;失三叉神經(jīng)支配對(duì)兔下頜骨牽張成骨影響的組織學(xué)觀察[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2009年03期

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本文編號(hào)：2872495