目的： 對于牙周炎伴牙周膿腫患者普雷沃菌屬的普遍性研究,比較API20a生化鑒定法和16S rRNA分子生物學(xué)方法鑒定普雷沃菌屬的準(zhǔn)確率,對分離鑒定的普雷沃菌進(jìn)行抗生素敏感性分析及耐藥基因檢測,為臨床治療牙周厭氧菌感染合理選用抗生素提供理論依據(jù)。 方法： 1.2011年8月-2012年8月,于復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院口腔科選取41例牙周膿腫患者(男21例,女20例,年齡：36±10歲)為研究對象。采用椅旁牙周膿腫取樣,接種于厭氧基礎(chǔ)平板和篩選平板,應(yīng)用簡易厭氧袋培養(yǎng)法,經(jīng)兩至三次耐氧實(shí)驗(yàn),培養(yǎng)的牙周膿腫專性厭氧菌以API20a生化鑒定法和16S rRNA分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行鑒定,進(jìn)一步篩選普雷沃菌屬。 2.根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(Clinical Laboratory Standards Institution)推薦的瓊脂稀釋法參考方案(M11-S220)測定牙周厭氧菌及普雷沃菌屬分別對甲硝唑、頭孢拉定、頭孢克肟、阿莫西林、克林霉素、羅紅霉素、多西環(huán)素、亞胺培南,8種臨床常用抗菌藥物的敏感性。 3.根據(jù)藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果獲得耐藥菌株,采用PCR法,分別檢測耐藥菌株nim、cfxA、 ermF、tetQ時(shí)藥基因,研究其普遍性。 結(jié)果： 1.簡易厭氧袋培養(yǎng)法分離培養(yǎng)的細(xì)菌具有良好的專性厭氧特性及傳代增殖能力。經(jīng)分離鑒定,牙周普雷沃菌屬的分離培養(yǎng)率為71.1%。以16S rRNA序列測定技術(shù)鑒定為標(biāo)準(zhǔn),API20a生化技術(shù)鑒定牙周普雷沃菌屬準(zhǔn)確率為83.3%,普雷沃菌種鑒定準(zhǔn)確率為38.1%。 2.藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示：牙周膿腫普雷沃菌對亞胺培南的耐藥率為0%,對多西環(huán)素和甲硝唑耐藥率分別為4.8%和9.5%,對克林霉素、阿莫西林、羅紅霉素及頭孢克肟的耐藥率分別為38.1%、30.9%、26.2%和9.5%。 3.普雷沃耐藥菌株的耐藥基因檢測結(jié)果顯示：13株阿莫西林耐藥菌株中,ofxA檢出率為61.5%,19株克林霉素和／或羅紅霉素耐藥菌株中,ermF檢出率為68.4%,4株甲硝唑耐藥普雷沃菌中,檢出2株nim基因陽性,均為nimBo4株多西環(huán)素耐藥菌株中,檢出2株tetQ陽性。 結(jié)論： 1.普雷沃菌屬是牙周膿腫厭氧菌群中的優(yōu)勢菌之一；API20a生化法鑒定普雷沃細(xì)菌種屬時(shí)存在一定誤差。 2.牙周膿腫來源的普雷沃菌對抗菌藥物的耐藥性不同,對口腔臨床常用藥物,克林霉素及羅紅霉素呈現(xiàn)的耐藥性較高；對青霉素類和甲硝唑的耐藥性的增長也需要引起注意。因此,在使用抗生素治療牙周膿腫之前,建議進(jìn)行厭氧菌抗生素敏感性監(jiān)測,以減少耐藥菌的產(chǎn)生。 3.不同耐藥基因在普雷沃耐藥菌中的檢出率存在差異。本實(shí)驗(yàn)中,cfxA、ermF耐藥基因在普雷沃耐藥菌中的檢出率較高,分別為61.5%,68.4%；而由于多西環(huán)素及甲硝唑耐藥菌株檢出較少,對于tetQ及nim的耐藥基因的普遍性還需進(jìn)一步研究。
【學(xué)位單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R781.4
【部分圖文】：

儀器設(shè)各?：微量移液器（Eppendorf公司，德國），SmartV i ew凝膠成像及分析系統(tǒng)（復(fù)H科技，中國），高速冷凍離心機(jī)Centrifuge5415R (Eppendorf公司，德國），顯微鏡(NIKON E200，中國），核酸定量儀Nanodrop 2000c (Thermo公司，美國），9700PCR儀（ABI，美國），電泳槽（TAITEC，円本）。、實(shí)驗(yàn)方法標(biāo)本米集與接種囑患者漱口后，無菌棉球隔濕，2%碘伏消毒牙周膿腫術(shù)區(qū)，用無菌刀片明顯的最低位處切開，lOul—次性接種環(huán)沾取膿血，立即接種于預(yù)還原氧血平板和厭氧基礎(chǔ)血平板，為便于在混合培養(yǎng)物中發(fā)現(xiàn)厭氧菌，標(biāo)本種平板，置于厭氧袋密封后，于:37°C (5-10%?^ 10%C02、8()-85%N2)專性培育3-5天。

儀器設(shè)各?：微量移液器（Eppendorf公司，德國），SmartV i ew凝膠成像及分析系統(tǒng)（復(fù)H科技，中國），高速冷凍離心機(jī)Centrifuge5415R (Eppendorf公司，德國），顯微鏡(NIKON E200，中國），核酸定量儀Nanodrop 2000c (Thermo公司，美國），9700PCR儀（ABI，美國），電泳槽（TAITEC，円本）。、實(shí)驗(yàn)方法標(biāo)本米集與接種囑患者漱口后，無菌棉球隔濕，2%碘伏消毒牙周膿腫術(shù)區(qū)，用無菌刀片明顯的最低位處切開，lOul—次性接種環(huán)沾取膿血，立即接種于預(yù)還原氧血平板和厭氧基礎(chǔ)血平板，為便于在混合培養(yǎng)物中發(fā)現(xiàn)厭氧菌，標(biāo)本種平板，置于厭氧袋密封后，于:37°C (5-10%?^ 10%C02、8()-85%N2)專性培育3-5天。

光滑、邊緣整齊、不溶血的菌落，伴有培養(yǎng)基惡臭，部分菌株3-7天后可見變黑色。詳見圖3、圖4�！� _圖3: Prevotellataxon 302 (不產(chǎn)黑色素普雷沃） 圖4:產(chǎn)黑普雷沃14
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 凌均棨;楊芳;滕飛;;新一代高通量技術(shù)在齲病相關(guān)的口腔菌群宏基因組學(xué)研究中的應(yīng)用[J];中華口腔醫(yī)學(xué)研究雜志(電子版);2011年04期

本文編號：2866914