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BMP-2與TGF-β3對DPSCs成骨向分化的對比研究

發(fā)布時間:2020-11-02 06:43
   目的:對比研究轉(zhuǎn)化生長因子-β3(Transforming growth factor-β3,TGF-β3)與骨形成蛋白-2(Bone morphogenic protein-2,BMP-2)分別對牙髓干細胞(Dental pulp stem cells,DPSCs)成骨向分化潛能的影響。方法:健康新西蘭幼兔4只,取牙髓組織采用酶解組織塊法分離培養(yǎng)獲得DPSCs,鏡下觀察細胞形態(tài)及生長狀況。將培養(yǎng)的第3代DPSCs分為BMP-2組和TGF-β3組,分別加入濃度為80 ug/L的BMP-2、TGF-β3的完全培養(yǎng)液,采用免疫組織化學(xué)法于誘導(dǎo)第3、7天檢測Ⅰ型膠原蛋白(Collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)表達,于第7、14天檢測骨鈣素(Osteocalcin,OCN)表達,應(yīng)用IPP圖像分析軟件測量累計吸光度(Integrated optical density,IOD)值;誘導(dǎo)第7、14天,對BMP-2組、TGF-β3組進行堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)染色后,倒置顯微鏡下觀察ALP活性染色結(jié)果。結(jié)果:兔DPSCs分離、培養(yǎng)約48 h,組織塊周圍有細胞游出、貼壁生長,培養(yǎng)的兔DPSCs大多為長梭形,也可為多角形,呈巢式或集落生長;TGF-β3組誘導(dǎo)第3天COL-1表達的IOD值(159676.799±63959.568)高于BMP-2組(44047.330±15853.656)(P0.05),誘導(dǎo)第7天COL-1表達的IOD值(245378.263±60084.607)與BMP-2組(223294.430±80266.723)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);TGF-β3組誘導(dǎo)第7天OC表達的IOD值(109568.817±14079.885)高于BMP-2組(55168.568±1694.930)(P0.05),誘導(dǎo)第14天OC表達的IOD值(411544.957±82803.243)與BMP-2組(360103.540±20835.362)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);BMP-2組、TGF-β3組誘導(dǎo)第7天出現(xiàn)少量淡藍色的ALP陽性區(qū),誘導(dǎo)第14天藍色ALP陽性區(qū)增大且藍染顏色加重,鏡下觀察2組無明顯差異。結(jié)論:與BMP-2比較,TGF-β3對早期兔DPSCs向成骨細胞分化有較明顯的促進作用。
【學(xué)位單位】:新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位年份】:2019
【中圖分類】:R78
【部分圖文】:

細胞,第三,干細胞,觀察鏡


新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié) 果細胞形態(tài)學(xué)觀察鏡下觀察酶解組織塊法取得的兔牙髓干細胞,經(jīng)過培養(yǎng) 2d 左右時就可見細圍組織塊游出(圖 1a),可見細胞成長梭形貼壁生長。原代細胞經(jīng)培養(yǎng) 7d 首次傳代,傳代細胞的兔牙髓干細胞多為長梭形,也可呈多角形狀,鏡下可均勻,胞核圓,呈巢式或集落生長(圖 1b)。傳代細胞約 5-7d 左右可達 80%匯可進行再次傳代。

碩士學(xué)位論文,統(tǒng)計學(xué)意義


新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文表 1 TGF-β3 組、BMP-2 組 OCN、COL-Ⅰ表達的 IOD 值比較 ( x±s)Tab 1 Comparison of IOD values of OCN and COL-I between TGF-β3 group and BMP-2 grou組別COL-1 OCN第 3 天 第 7 天 第 7 天 第 14 天BMP-2 組 44047.33±15853.65223294.43±80266.7255168.56±1694.93360103.5420835.3TGF-β3 組 159676.79±63959.56245378.26±60084.60109568.82±14079.88411544.9582803.2t 值 6.219 0.376 3.801 5.888P 值 0.038 0.722 0.003 0.356注:P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

藍色,顏色,對照組


3d 3e 3f圖 3 a 為 PBS 陰性對照組;b 為 BMP-2 組誘導(dǎo)第 7 天;c 為 BMP-2 組誘導(dǎo)第 14 天;d 為 PBS 性對照組;e 為 TGF-β3 組誘導(dǎo)第 7 天;f 為 TGF-β3 組誘導(dǎo)第 14 天。Fig.3 Immunohistochemical staining for OCN after 7d,14d(200x)3 TGF-β3 組、BMP-2 組 ALP 染色結(jié)果比較BMP-2 組、TGF-β3 組誘導(dǎo)第 7 天出現(xiàn)少量淡藍色的 ALP 陽性區(qū),誘導(dǎo)第 14 藍色 ALP 陽性區(qū)增大且藍染顏色加重,鏡下觀察 2 組無明顯差異,如圖 4。
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本文編號:2866708

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