牙周病是一種以破壞牙周支持結(jié)構(gòu)，并最終導(dǎo)致牙齒脫落的慢性進(jìn)展性疾病。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)：美國(guó)有大約30-40%的成年人患有不同程度的牙周疾病，在我國(guó)中老年人群中慢性牙周炎的發(fā)病率甚至高達(dá)70%，牙周炎的防治面臨嚴(yán)峻的形勢(shì)和挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)牙周治療方法例如超聲潔治、齦下刮治、翻瓣術(shù)等，以及近年來(lái)廣泛開(kāi)展的引導(dǎo)組織再生技術(shù)（guided tissueregeneration, GTR）、Vector治療、各種骨移植術(shù)等，都沒(méi)有達(dá)到牙周預(yù)期的治療效果，特別是不能實(shí)現(xiàn)牙周組織的生理和功能性再生。組織工程（Tissueengineering, TE）研究為牙周疾病的治療和牙周缺損的修復(fù)開(kāi)辟了新的研究空間，特別是利用自體來(lái)源的牙周膜干細(xì)胞（Periodontal ligament stem cells,PDLSCs）來(lái)修復(fù)牙周組織缺損在多種動(dòng)物模型中取得了令人振奮的結(jié)果，甚至有學(xué)者已經(jīng)開(kāi)始臨床病例的嘗試。大規(guī)模、多中心地臨床研究呼之欲出。然而，在臨床病例的選擇中，年齡因素肯定會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生直接影響，但目前還沒(méi)有這方面系統(tǒng)的探索和研究。本研究對(duì)不同年齡組PDLSCs的性能進(jìn)行了對(duì)比分析，并將自體來(lái)源的PDLSCs引入臨床，治療牙周病所致骨下袋組織缺損。 第一部分：實(shí)驗(yàn)部分 【目的】 分析對(duì)比不同年齡階段患者的第三磨牙中PDLSCs的生物學(xué)特性,分析年齡因素對(duì)PDLSCs干細(xì)胞性能的影響，完善PDLSCs的基礎(chǔ)知識(shí)，為PDLSCs的進(jìn)一步臨床轉(zhuǎn)化研究提供病例選擇依據(jù)。 【方法】 經(jīng)第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，選取因阻生需要拔除的第三磨牙90顆（上頜36顆，下頜54顆），來(lái)源于54位不同的患者，根據(jù)患者年齡分為A（年齡16-30歲）、B（年齡31-40歲）、C（年齡41-55歲）、和D（年齡55-75歲），刮取患者牙根中1/3的牙周膜組織，原代培養(yǎng)不同年齡組人牙周膜細(xì)胞（periodontal ligament cells），有限稀釋法克隆培養(yǎng)人PDLSCs。對(duì)不同組之間的PDLSCs進(jìn)行細(xì)胞克隆能力\生長(zhǎng)曲線的測(cè)定，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表面分子，并對(duì)4組患者的PDLSCs進(jìn)行成脂及成骨誘導(dǎo)，量化后統(tǒng)計(jì)分析不同年齡組患者PDLSCs的分化能力的差異，最后制備PDLSCs膜片（cell sheets），復(fù)合Bio-Oss骨粉，裸鼠體內(nèi)（背部皮下）植入，觀察PDLSCs體內(nèi)組織形成能力的差異。 【結(jié)果】 四組病例資料情況：A組（平均年齡22.3±7.7歲，男8例，女8例），B組（平均年齡35.6±4.3歲，男7例，女7例），C組（平均年齡48.2±6.1歲，男6例，女6例），D組（平均年齡62.6±6.8歲，男7例，女6例）。改良組織塊法原代培養(yǎng)細(xì)胞，A組3-7天均有大量細(xì)胞長(zhǎng)出，而D組最晚10天才有細(xì)胞爬出組織塊；細(xì)胞相互接觸匯合成片達(dá)80％時(shí)間A組平均12天，D組18天。MTT法檢測(cè)見(jiàn)D組細(xì)胞生長(zhǎng)相對(duì)緩慢，與A組相比有顯著差異（P0.05）。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞分子表型結(jié)果顯示，所有樣本干細(xì)胞在表面分子的表達(dá)上呈現(xiàn)相似特征。陽(yáng)性表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞特異的表面標(biāo)記（CD29、CD44、CD90、CD105、CD146和STRO-1），陰性表達(dá)造血系細(xì)胞（CD34）和內(nèi)皮細(xì)胞特異的分子表型（CD31）均一致。成脂、成骨量化分析顯示A、B、C、D組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，隨著年齡增長(zhǎng)，PDLSCs多向分化能力明顯減弱（P0.05）。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示A、B、C組細(xì)胞均具有較好的組織再生能力。 【結(jié)論】 該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示年齡因素對(duì)人PDLSCs增殖和分化能力造成明顯影響，隨著年齡增長(zhǎng)，細(xì)胞增殖與分化能力產(chǎn)生明顯下降。老年人患者來(lái)源的第三磨牙牙周膜中仍然存在PDLSCs，并具有基本的間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cell, MSC）特性，只是在與年輕人來(lái)源的PDLSCs相比，其增殖與分化能力相對(duì)較弱。這些干細(xì)胞是否仍然可以用于干細(xì)胞治療研究，尚需要進(jìn)一步深入探討。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示在臨床轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中，利用自體PDLSCs治療牙周病，初期應(yīng)盡量避免納入老年患者。 第二部分：病例報(bào)道 選取2例牙周炎所致骨下袋組織缺損的病例，經(jīng)第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，利用自體來(lái)源的PDLSCs膜片復(fù)合Bio-Oss骨粉治療，觀察3-6月，牙周愈合良好，無(wú)任何不良反應(yīng)，臨床療效評(píng)估待術(shù)后6-12月綜合評(píng)估。
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R781.4
【部分圖文】：

牙周膜原代培養(yǎng)，細(xì)胞從組織塊爬出（14d，×40）

牙周膜原代培養(yǎng)細(xì)胞匯合情況分析（*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001）

單細(xì)胞克隆培養(yǎng)（14d，×20））
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 高秦;劉宏偉;金巖;聶鑫;劉源;;人牙周膜干細(xì)胞的體外分離、純化及初步鑒定[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2006年01期

本文編號(hào)：2857851