發(fā)布時間：2020-10-27 01:59

　　 牙周病是一種以破壞牙周支持結(jié)構(gòu)，并最終導致牙齒脫落的慢性進展性疾病。據(jù)不完全統(tǒng)計：美國有大約30-40%的成年人患有不同程度的牙周疾病，在我國中老年人群中慢性牙周炎的發(fā)病率甚至高達70%，牙周炎的防治面臨嚴峻的形勢和挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)牙周治療方法例如超聲潔治、齦下刮治、翻瓣術等，以及近年來廣泛開展的引導組織再生技術（guided tissueregeneration, GTR）、Vector治療、各種骨移植術等，都沒有達到牙周預期的治療效果，特別是不能實現(xiàn)牙周組織的生理和功能性再生。組織工程（Tissueengineering, TE）研究為牙周疾病的治療和牙周缺損的修復開辟了新的研究空間，特別是利用自體來源的牙周膜干細胞（Periodontal ligament stem cells,PDLSCs）來修復牙周組織缺損在多種動物模型中取得了令人振奮的結(jié)果，甚至有學者已經(jīng)開始臨床病例的嘗試。大規(guī)模、多中心地臨床研究呼之欲出。然而，在臨床病例的選擇中，年齡因素肯定會對結(jié)果產(chǎn)生直接影響，但目前還沒有這方面系統(tǒng)的探索和研究。本研究對不同年齡組PDLSCs的性能進行了對比分析，并將自體來源的PDLSCs引入臨床，治療牙周病所致骨下袋組織缺損。 第一部分：實驗部分 【目的】 分析對比不同年齡階段患者的第三磨牙中PDLSCs的生物學特性,分析年齡因素對PDLSCs干細胞性能的影響，完善PDLSCs的基礎知識，為PDLSCs的進一步臨床轉(zhuǎn)化研究提供病例選擇依據(jù)。 【方法】 經(jīng)第四軍醫(yī)大學口腔醫(yī)學院倫理委員會批準，選取因阻生需要拔除的第三磨牙90顆（上頜36顆，下頜54顆），來源于54位不同的患者，根據(jù)患者年齡分為A（年齡16-30歲）、B（年齡31-40歲）、C（年齡41-55歲）、和D（年齡55-75歲），刮取患者牙根中1/3的牙周膜組織，原代培養(yǎng)不同年齡組人牙周膜細胞（periodontal ligament cells），有限稀釋法克隆培養(yǎng)人PDLSCs。對不同組之間的PDLSCs進行細胞克隆能力\生長曲線的測定，并進行統(tǒng)計學分析。流式細胞儀鑒定細胞表面分子，并對4組患者的PDLSCs進行成脂及成骨誘導，量化后統(tǒng)計分析不同年齡組患者PDLSCs的分化能力的差異，最后制備PDLSCs膜片（cell sheets），復合Bio-Oss骨粉，裸鼠體內(nèi)（背部皮下）植入，觀察PDLSCs體內(nèi)組織形成能力的差異。 【結(jié)果】 四組病例資料情況：A組（平均年齡22.3±7.7歲，男8例，女8例），B組（平均年齡35.6±4.3歲，男7例，女7例），C組（平均年齡48.2±6.1歲，男6例，女6例），D組（平均年齡62.6±6.8歲，男7例，女6例）。改良組織塊法原代培養(yǎng)細胞，A組3-7天均有大量細胞長出，而D組最晚10天才有細胞爬出組織塊；細胞相互接觸匯合成片達80％時間A組平均12天，D組18天。MTT法檢測見D組細胞生長相對緩慢，與A組相比有顯著差異（P0.05）。流式細胞儀檢測細胞分子表型結(jié)果顯示，所有樣本干細胞在表面分子的表達上呈現(xiàn)相似特征。陽性表達間充質(zhì)干細胞特異的表面標記（CD29、CD44、CD90、CD105、CD146和STRO-1），陰性表達造血系細胞（CD34）和內(nèi)皮細胞特異的分子表型（CD31）均一致。成脂、成骨量化分析顯示A、B、C、D組間有統(tǒng)計學差異，隨著年齡增長，PDLSCs多向分化能力明顯減弱（P0.05）。體內(nèi)實驗結(jié)果顯示A、B、C組細胞均具有較好的組織再生能力。 【結(jié)論】 該實驗結(jié)果顯示年齡因素對人PDLSCs增殖和分化能力造成明顯影響，隨著年齡增長，細胞增殖與分化能力產(chǎn)生明顯下降。老年人患者來源的第三磨牙牙周膜中仍然存在PDLSCs，并具有基本的間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cell, MSC）特性，只是在與年輕人來源的PDLSCs相比，其增殖與分化能力相對較弱。這些干細胞是否仍然可以用于干細胞治療研究，尚需要進一步深入探討。我們的實驗結(jié)果提示在臨床轉(zhuǎn)化醫(yī)學研究中，利用自體PDLSCs治療牙周病，初期應盡量避免納入老年患者。 第二部分：病例報道 選取2例牙周炎所致骨下袋組織缺損的病例，經(jīng)第四軍醫(yī)大學口腔醫(yī)學院倫理委員會批準，利用自體來源的PDLSCs膜片復合Bio-Oss骨粉治療，觀察3-6月，牙周愈合良好，無任何不良反應，臨床療效評估待術后6-12月綜合評估。
【學位單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2012
【中圖分類】：R781.4
【部分圖文】：

牙周膜原代培養(yǎng)，細胞從組織塊爬出（14d，×40）

牙周膜原代培養(yǎng)細胞匯合情況分析（*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001）

單細胞克隆培養(yǎng)（14d，×20））
【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 高秦;劉宏偉;金巖;聶鑫;劉源;;人牙周膜干細胞的體外分離、純化及初步鑒定[J];實用口腔醫(yī)學雜志;2006年01期

本文編號：2857851