骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(Bone morphogenetic proteins-2, BMP2)最早是作為調(diào)節(jié)骨形成的重要因子而被發(fā)現(xiàn)的,它對(duì)骨骼的胚胎發(fā)育和再生修復(fù)起重要作用�，F(xiàn)在研究認(rèn)為,它參與調(diào)節(jié)許多種細(xì)胞的增殖、分化和凋亡的生物學(xué)過程,越來越多的研究顯示BMP2信號(hào)通路參與多種腫瘤的進(jìn)展。本研究旨在以腺病毒為載體轉(zhuǎn)染BMP2至舌癌Tca8113細(xì)胞,觀察舌癌細(xì)胞系Tca8113在轉(zhuǎn)染BMP2后生物學(xué)行為的變化,檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后BMP-SMAD通路的變化,來探討B(tài)MP2對(duì)于舌癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其分子生物學(xué)調(diào)控機(jī)制,以尋求更為有效的基因治療方法。 目的 觀察BMP2對(duì)于舌癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,研究BMP-SMAD通路對(duì)舌癌細(xì)胞的調(diào)控作用,并建立舌癌動(dòng)物模型,觀察BMP2對(duì)裸鼠舌癌移植瘤的治療作用。 方法 1.舌癌細(xì)胞的培養(yǎng)：復(fù)蘇舌癌細(xì)胞系Tca8113, RPMI1640體外培養(yǎng),觀察細(xì)胞的形態(tài)及增值活性。 2.觀察BMP2對(duì)Tca8113細(xì)胞的作用和機(jī)制：利用不同濃度重組腺病毒介導(dǎo)的BMP2基因轉(zhuǎn)染Tca8113細(xì)胞,Western blot檢測(cè)不同組Tca8113細(xì)胞中BMP2、Smad1/5表達(dá)的差異。 3.觀察BMP2對(duì)Tca8113細(xì)胞生物學(xué)行為的影響：利用腺病毒介導(dǎo)增強(qiáng)型綠色熒光BMP2基因轉(zhuǎn)染至Tca8113細(xì)胞,觀察細(xì)胞形態(tài)的改變,檢測(cè)細(xì)胞增值活性的改變,檢測(cè)Smad的通路作用途徑。 4.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：于SCID鼠腹股溝皮下建立腫瘤模型,腫瘤形成后,采用腺病毒介導(dǎo)的BMP2基因作瘤內(nèi)注射,觀察腫瘤體積的變化。 結(jié)果 1.舌癌細(xì)胞培養(yǎng)：Tca8113細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定,形態(tài)正常,腫瘤細(xì)胞增值較快,約于第3天進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,第5天進(jìn)入平臺(tái)期。 2.腺病毒介導(dǎo)的BMP2基因轉(zhuǎn)染Tca8113細(xì)胞后,Western blot檢測(cè)到不同組細(xì)胞間的BMP2、Smad1/5的表達(dá)有明顯的差異,轉(zhuǎn)染組BMP2的濃度越高,Smadl/5的表達(dá)量越高。 3.腺病毒介導(dǎo)增強(qiáng)型綠色熒光BMP2基因轉(zhuǎn)染至Tca8113細(xì)胞后,16h即可見到綠色熒光表達(dá),以后逐漸增強(qiáng),48h后可見到較強(qiáng)的熒光表達(dá),病毒MOI為100時(shí),轉(zhuǎn)染效率較高,細(xì)胞形態(tài)未見明顯變化,MTT檢測(cè)細(xì)胞增值活性明顯降低,熒光在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核中表達(dá)明顯。 4.SCID鼠皮下移植瘤于2周后長(zhǎng)大到直徑平均約0.6cm,瘤內(nèi)注射腺病毒介導(dǎo)的BMP2基因,腫瘤生長(zhǎng)受到明顯抑制,各組腫瘤大小有明顯差異。結(jié)論 1.以腺病毒為載體的BMP2成功轉(zhuǎn)染至Tca8113細(xì)胞,并進(jìn)行Western blot鑒定,表明目的蛋白已整合到Tca8113細(xì)胞中,并進(jìn)行有效地表達(dá)。 2.BMP2蛋白轉(zhuǎn)染至舌癌Tca8113細(xì)胞,能顯著提高Smad1和Smad5蛋白的表達(dá)。 3.BMP2對(duì)舌癌Tca8113細(xì)胞的增值有明顯的抑制作用,其信號(hào)由Smad1/5蛋白由細(xì)胞外轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)入細(xì)胞核,進(jìn)而在細(xì)胞核中發(fā)揮其調(diào)節(jié)作用。 4.BMP2對(duì)舌癌Tca8113細(xì)胞形態(tài)沒有明顯的影響。 5.舌癌動(dòng)物模型構(gòu)建成功,BMP2對(duì)SCID鼠移植瘤生長(zhǎng)有明顯的抑制作用。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R739.8
【部分圖文】：

山東大學(xué)碩士學(xué)位論文Rp標(biāo)記的二抗，室溫孵育th，緩慢搖動(dòng)。S/T洗膜三次，每次lomin，邊洗邊搖。A和B兩種試劑在保鮮膜上等體積混合，1而n后，將膜合液充分接觸，lmin后，將膜移至另一保鮮膜上，放曝光。結(jié)果符合鱗癌細(xì)胞形態(tài)特征，倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，細(xì)長(zhǎng)，立體感不強(qiáng)，培養(yǎng)3一5天后，集落增多融合成片，鋪的傳代，傳代過程中各代細(xì)胞均排列有序，見圖1，圖

BMPZ、Smadl、Smads在蛋白水平的表空轉(zhuǎn)染24h一BMPZ轉(zhuǎn)染組，轉(zhuǎn)染24hd一BMPZ轉(zhuǎn)染組，轉(zhuǎn)染24h4BMPZ、Smadl和Smads的表達(dá)

BMPZ、Smadl和Smads的表達(dá)
【參考文獻(xiàn)】

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1 李澤良;劉仁輝;孔垂?jié)?;骨形態(tài)發(fā)生蛋白2和4在前列腺癌中的表達(dá)[J];中華男科學(xué)雜志;2006年02期

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本文編號(hào)：2849723