目的:探討牙周組織炎癥對Aβ誘導(dǎo)的大鼠學(xué)習(xí)記憶功能減退發(fā)生發(fā)展的影響及腦內(nèi)炎癥因子表達(dá)的影響。方法:將96只雄性SD大鼠隨機(jī)分成3組:空白組(Control組,12只)、對照組36只【含Aβ1μl對照組(Aβ1μl組,12只)、Aβ2μl對照組(Aβ2μl組,12只)和模型對照組(Aβ5μl組,12只)】和實驗組48只【含牙周炎組(CP組,12只)、Aβ1μl實驗組(CP+Aβ1μl組,12只)、Aβ2μl實驗組(CP+Aβ2μl組,12只)和模型實驗組(CP+Aβ5μl組,12只)】。實驗組48只大鼠建立大鼠重度牙周炎模型后,將除CP組外的實驗組大鼠(共36只),與對照組大鼠一起,行海馬區(qū)Aβ_(25-35)注射,其中Aβ1μl組及CP+Aβ1μl組每只大鼠每側(cè)海馬注射1μlAβ_(25-35);Aβ2μl組及CP+Aβ2μl組每只大鼠每側(cè)海馬注射2μlAβ_(25-35);Aβ5μl組及CP+Aβ5μl組每只大鼠每側(cè)海馬注射5μlAβ_(25-35)制備散發(fā)性老年癡呆(sporadic Alzheimer’s Disease,SAD)動物模型。從海馬區(qū)注射Aβ_(25-35)后第14天開始,連續(xù)4天使用Morris水迷宮法檢測重度牙周炎及海馬區(qū)注射Aβ_(25-35)對大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶功能的影響,并在該測試結(jié)束后第二天,進(jìn)行空間探索實驗。空間探索結(jié)束后立即安樂處死所有大鼠并對全腦、腦皮質(zhì)及海馬區(qū)腦組織、上頜雙側(cè)牙槽骨進(jìn)行取材;截取SD大鼠一側(cè)上頜骨制作石蠟切片,進(jìn)行HE染色后觀察其組織學(xué)變化,另一側(cè)經(jīng)亞甲藍(lán)染色后以微焦相機(jī)拍攝數(shù)碼照片,觀察牙槽骨吸收的情況;制作腦組織的病理切片,HE染色觀察大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元形態(tài)及密度,ELISA法檢測腦皮質(zhì)及海馬區(qū)IL-1、IL-6、CRP、TNF-α、Aβ_(1-40)的蛋白含量。結(jié)果:(1)牙周組織病理學(xué)切片顯示:空白組、對照組大鼠牙槽骨及牙周組織均無明顯異常改變。實驗組出現(xiàn)重度牙周炎癥狀,實驗組的SD大鼠上頜第二磨牙牙槽嵴頂退縮,上皮表面糜爛,部分上皮釘突網(wǎng)狀增生,大量炎細(xì)胞浸潤,膠原纖維增生,可見破骨細(xì)胞。數(shù)碼照片觀察可見:所有實驗組大鼠上頜第二磨牙牙槽骨高度明顯下降,根分叉暴露,骨吸收達(dá)根尖1/3。(2)對各組的Morris水迷宮實驗數(shù)據(jù)分析顯示,與空白組相比,Aβ5μl組及CP+Aβ5μl組逃逸潛伏期較長,學(xué)習(xí)記憶能力較差,且具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異;其余組的逃逸潛伏期較空白組相比均存在差異,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義;實驗組與對照組海馬區(qū)注射相同劑量Aβ_(25-35)的各組之間的逃逸潛伏期的差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。此外各組大鼠在游泳速度上未見顯著差異。(3)本實驗結(jié)果顯示,在所有腦皮質(zhì)及海馬區(qū)腦組織中,均可檢測到IL-1、IL-6、CRP、TNF-α、Aβ_(1-40)的存在。相較于空白組,以上四種炎癥因子及Aβ_(1-40)的含量在所有對照組及實驗組海馬區(qū)及腦皮質(zhì)中均有升高且大部分上升具有統(tǒng)計學(xué)差異。與對照組相比,幾乎所有實驗組海馬區(qū)及腦皮質(zhì)以上四種炎癥因子及Aβ_(1-40)的含量均有升高且部分上升具有統(tǒng)計學(xué)差異。(4)腦組織石蠟切片HE染色結(jié)果顯示:空白組和PD組大鼠海馬神經(jīng)元數(shù)量豐富,結(jié)構(gòu)完整,核仁清晰可見。Aβ5μl組及CP+Aβ5μl組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元排列層次減少,部分細(xì)胞出現(xiàn)明顯的深染、細(xì)胞核固縮現(xiàn)象,細(xì)胞間隙增大,CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)量較空白組顯著減少,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;其余組大鼠海馬神經(jīng)元均有不同程度數(shù)量減少及部分深染、細(xì)胞核固縮的現(xiàn)象。結(jié)論:合并重度牙周炎對Aβ誘導(dǎo)的大鼠學(xué)習(xí)記憶功能減退的影響無顯著差異,但重度牙周炎可能通過促進(jìn)SD大鼠腦內(nèi)炎癥因子的表達(dá)和累積,加速阿爾茲海默病的發(fā)生和加重阿爾茲海默病發(fā)展。
【學(xué)位單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R781.42
【部分圖文】：

遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 楊逢春B2 結(jié)果2.1 實驗組牙周組織破壞情況肉眼觀察上頜第二磨牙牙周組織，相比于空白組，實驗組絲線及鋼絲均存留在頸部，且絲線附近見軟垢及牙石存在，牙齦紅腫、充血，探診出血，有牙周袋形成附著喪失，牙齒松動度為Ⅱ～Ⅲ°，而空白組及對照組的牙周情況未見明顯異常。HE 染色結(jié)果顯示，相比于空白組及對照組，實驗組大鼠的上頜第二磨牙近遠(yuǎn)鄰面軟組織退縮，牙槽嵴頂退縮，牙槽骨吸收嚴(yán)重，可見破骨細(xì)胞，上皮表面糜爛上皮釘突局部成網(wǎng)狀增生，新生毛細(xì)血管增生，膠原纖維增生（見圖 2-1）。A

A圖 2-2 A 實驗組大鼠重度牙周炎牙槽骨數(shù)碼照片（代表圖）;B 空白組及對照組大鼠牙槽骨數(shù)碼照片（代表圖）Fig 2-2 A.digital photos of alveolar bone in rats with severe periodontitis in experimental group (representativemap).;B digital photos of alveolar bone in blank group and control group (representative map)2.2 重度牙周炎對 Aβ25-35 海馬區(qū)注射后大鼠學(xué)習(xí)記憶功能和運動能力的影響以 Morris 水迷宮實驗對各組大鼠進(jìn)行行為學(xué)測試。用重復(fù)測量數(shù)據(jù)方差分析法分析各組大鼠在 4 天水迷宮實驗中的逃逸潛伏期，球形檢驗 P=0.252，接受球形檢驗結(jié)果顯示時間因素有統(tǒng)計學(xué)差異，說明各組大鼠的逃逸潛伏期隨時間的變化而變化；分組主效應(yīng)亦有統(tǒng)計學(xué)差異，說明逃逸潛伏期隨分組的不同而具有差異；但時間和分組的交互效應(yīng)無統(tǒng)計學(xué)差異。B

圖 2-3 各組每天平均逃逸潛伏期，( ± ,n=8),+vs 空白組 P<0.01。Fig2-3 mean escape latency in each group of 4 days’trials,( ,n=8)+P<0.01vsControl group.在第 5 天的實驗中，對各組大鼠的游泳速度和穿越平臺次數(shù)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示各組大鼠的游泳速度無顯著差異，表明各組大鼠不因游泳速度的差異而導(dǎo)致逃逸潛伏期的不同；各組大鼠穿越平臺次數(shù)均無顯著差異。(見圖 2-4）
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 歐陽翔英;;關(guān)于重度牙周炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[J];中華口腔醫(yī)學(xué)雜志;2017年02期

2 李林;;中國阿爾茨海默病研究進(jìn)展[J];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2015年05期

3 封敏;盧圣鋒;張承舜;余曙光;;國內(nèi)大鼠Morris水迷宮實驗現(xiàn)狀與分析[J];遼寧中醫(yī)雜志;2011年11期

4 陳羅西;郭玲玲;李亮;;Morris圓形水迷宮的應(yīng)用及其相關(guān)檢測指標(biāo)分析[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2008年08期

本文編號：2849851