發(fā)布時間：2020-10-16 09:50

　　 目的:研究短發(fā)夾RNA(short-hairpin RNA, shRNA)干擾抑制血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表達(dá),對人舌癌耐藥細(xì)胞Tca/DDP移植瘤的影響及其可能機(jī)制。 方法:將人舌癌Tca8113耐藥細(xì)胞Tca/DDP接種于裸鼠皮下,建立移植瘤模型,并隨機(jī)分為空白對照組(非轉(zhuǎn)染組)、空載體組(轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒載體)、無關(guān)片段組(轉(zhuǎn)染無關(guān)對照質(zhì)粒)、干擾質(zhì)粒組(轉(zhuǎn)染靶向VEGF的shRNA表達(dá)載體),每組6只�？蛰d體組、無關(guān)片段組、干擾質(zhì)粒組在接種第7d,以脂質(zhì)體法在瘤內(nèi)及瘤周注射轉(zhuǎn)染質(zhì)粒。觀測移植瘤生長曲線,轉(zhuǎn)染10次后取瘤體稱重,原位雜交法檢測移植瘤的VEGF mRNA,免疫印跡法檢測移植瘤VEGF蛋白,免疫組化法檢測CD34及細(xì)胞增殖抗原Ki67的表達(dá)比較移植瘤微血管參數(shù)及增殖性,并檢測多藥耐藥蛋白P糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病因子-2(B cell lymphoma/leukemia-2, bcl-2)及胞外信號調(diào)節(jié)激酶2(extracellular signal-regulated kinase 2, ERK2)蛋白表達(dá)。 結(jié)果:干擾質(zhì)粒組的瘤體生長明顯受到抑制(P0.05),移植瘤重量、微血管參數(shù)及增殖性低于其它3組(P0.05),且VEGF的mRNA及蛋白、P-gp、bcl-2及ERK2蛋白表達(dá)顯著減少(P0.05)。 結(jié)論:RNA干擾抑制VEGF的表達(dá),可減少P-gp的表達(dá),并可能通過下調(diào)bcl-2及ERK2表達(dá)水平,抑制人舌癌Tca8113耐藥細(xì)胞移植瘤的生長增殖及血管生成,提示靶向抑制VEGF可能為治療耐藥舌癌提供新途徑。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類】：R739.8
【部分圖文】：

少（F=7.833,P=0.001；F=6.487,P=0.003），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其他各組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）(表 1)。圖1 裸鼠移植瘤生長曲線Fig.1 Growth curve of xenografts of nude mice showed xenografts of interference group grewsignificantly slowly.表1 皮下接種后第37d各組裸鼠移植瘤的體積與重量Tab.1 Sizes and weights of xenografts on the 37th day after subcutaneous injection體積(mm3) 重量(g)空白對照組 827.99±104.56* 0.7060±0.1026*空載體組 802.12±109.41* 0.6962±0.1206*無關(guān)片段組 765.25±101.50* 0.6727±0.1019*干擾質(zhì)粒組 568.67±96.25 0.4781±0.0860注：與干擾組質(zhì)粒比較，*P<0.01。

A 空白對照組 B 空載體組 C 無關(guān)片段組 D 干擾質(zhì)粒組圖 2 在體及離體裸鼠移植瘤Fig2 Xenografts of mice in vivo and in vitro2. 原位雜交法檢測移植瘤中 VEGF mRNA 的表達(dá)：干擾質(zhì)粒組移植瘤組織中 VEGF mRNA 的平均光密度（0.08±0.02），顯著低于空白對照組（0.19±0.04）、空載體組（0.17±0.03）及無關(guān)片段組（0.16±0.04）(F=11.998，P=0.001)，后 3 組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）（圖 3）。A B C D

A B C DA：空白對照組；B：空載體組；C：無關(guān)片段組；D：干擾質(zhì)粒組圖3 原位雜交法檢測裸鼠移植瘤組織的VEGF mRNA（×400）Fig.2 In situ hybridization showed that the expression of VEGF mRNA in xenografts ofinterference group was less than that of non-transfected group, mock control group andcontrol group transfected with scrambled sequence plasmid (P<0.05).3. Western blotting 檢測 VEGF 蛋白：相對灰度值結(jié)果顯示干擾質(zhì)粒組中 VEGF 蛋白的表達(dá)（0.81±0.15）低于空白對照組（1.68±0.62）、空載體組（1.63±0.61）、無關(guān)片段組（1
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2843095