目的觀察小干擾RNA(small interfering RNA, siRNA)抑制血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表達對裸鼠皮下人舌癌Tca8113細胞移植瘤的治療作用。 方法構建人舌癌Tca8113細胞20只裸鼠皮下移植瘤模型,隨機分為4組。將兩對針對VEGF的siRNA真核表達載體(Pu-VEGF-siRNA1,Pu-VEGF-siRNA2)脂質體法作瘤體內及瘤周注射;以注射空質粒組作實驗對照組;未注射組作空白對照組。觀察各組裸鼠腫瘤生長情況。注射每3天1次共10次,最后1次注射3天后測量瘤體積,剝離瘤體并稱重,流式細胞儀檢測腫瘤細胞懸液的細胞周期比例, RT-PCR檢測瘤組織VEGF-mRNA表達,免疫印跡技術(Western blot)檢測瘤組織VEGF蛋白表達。免疫組織化學法觀察VEGF陽性染色及微血管密度,Tunel法觀察組織細胞凋亡。 結果Pu-VEGF-siRNA2組移植瘤體積和瘤重較對照組低,細胞G1期比例增加,瘤組織VEGF-mRNA表達及VEGF蛋白表達,組織切片VEGF陽性表達率,陽性細胞平均灰度值及微血管密度均較空質粒組及空白對照組低(P0.05),并有更多的凋亡細胞(P0.01)。而Pu-VEGF-siRNA1組未觀察到上述差別(P0.05)。 結論siRNA能在體內抑制舌癌VEGF表達,減少腫瘤血管生成,延緩腫瘤生長。不同的干擾片段體內作用效果存在差異。
【學位單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2009
【中圖分類】：R739.8
【部分圖文】：

型的建立及處理 Tca8113 細胞用含 10％小牛血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)增殖。實驗用裸鼠，雌性， 4~6 25～27℃無菌恒溫、恒濕( 45% ～50%) 的半屏障料、飲用水及墊料經高壓滅菌處理，每 3 d 更換生長期細胞胰酶消化吹打離心，調整濃度至 1×10 30 只裸鼠一側背部皮下，建立裸鼠皮下人舌癌移大部分成瘤。剝取其中一只裸鼠的移植瘤，病理切例及血管竇，并見有核分裂相, 證實為腫瘤組織。

各組荷瘤裸鼠大體觀察

q=0.3447、1.0266， P>0.05。空質粒組與空白對照組間各指標差別均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）1 2 3 4圖3 人舌癌移植瘤離體觀察: 1: siRNA1組, 2: siRNA2組, 3: 空質粒組, 4: 空白對照組。
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本文編號：2842965