目的:研究環(huán)孢素A(CsA)與內(nèi)毒素(LPS)對體外培養(yǎng)人牙齦成纖維細胞(GFs)的影響,通過建立CsA誘發(fā)牙齦增生的大鼠動物模型來研究牙齦炎癥對牙齦增生的影響。 方法:實驗1.采用改良組織塊法培養(yǎng)人GFs,用形態(tài)學(xué)、免疫細胞化學(xué)技術(shù)、四甲基偶氮唑藍比色等方法測定其生物學(xué)特性。實驗2.用800ng/mlCsA、100ng/mlLPS、800ng/mlCsA +100ng/mlLPS作用于生長良好的第4-8代人GFs, MTT法測定細胞增殖情況,ELISA法檢測細胞上清中的TGF-β1分泌的變化。實驗3.將18只SD大鼠隨機分為三組,每只大鼠于右側(cè)下頜第一磨牙牙頸部結(jié)扎正畸用鋼絲,各組分別于1、2、4周后處死,觀察牙周病變的發(fā)展,并確定實驗動物牙齦炎發(fā)生的時間。實驗4.將34只SD大鼠隨機分為對照組、單純結(jié)扎組、單純用藥組、結(jié)扎+用藥組四組,用藥組予以CsA每日灌胃9周誘發(fā)藥物性牙齦增生。取血用ELISA法檢測各組血清中TGF-β1含量變化。取下頜磨牙做病理切片,HE染色觀察牙周組織變化。 結(jié)果: 1.人GFs原代培養(yǎng)成功率達到80%,細胞呈梭形,細胞免疫化學(xué)檢測為波形絲蛋白陽性,I型膠原表達陽性。2.細胞經(jīng)CsA或LPS作用后形態(tài)無明顯變化,CsA能促進細胞增殖和分泌TGF-β1, LPS作用與其相反,二者聯(lián)合作用能明顯促進細胞的生長及TGF-β1分泌,比單純使用CsA作用更明顯。3.牙頸部結(jié)扎鋼絲的方法能成功建立大鼠牙周炎模型,在結(jié)扎1周后牙齦即可出現(xiàn)牙齦炎,在第4周時有牙周炎的表現(xiàn)。4.使用CsA油溶液灌胃9周,成功建立大鼠藥物性牙齦增生的模型,用藥組大鼠體重下降,前后牙牙齦皆有明顯增生,炎癥+用藥組牙齦增生更加明顯。用藥后大鼠比未用藥大鼠血清中TGF-β1的表達量有明顯增加,而是否接扎對血清中TGF-β1并沒有影響。 結(jié)論: 1.CsA與LPS在GFs增殖和TGF-β1分泌方面有協(xié)同作用。2.牙頸部結(jié)扎鋼絲的方法可成功建立牙周炎模型,1周后即可出現(xiàn)牙齦炎。3.在炎癥存在下,CsA誘發(fā)的牙齦增生會更加明顯,TGF-β1可能是該發(fā)病機制的重要因子。
【學(xué)位單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類】：R781.4
【部分圖文】：

胞漿突 2-4 個，胞漿均勻，細胞核呈圓形生長特點是貼壁生長，隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加呈扁平的多角形細胞，在胞質(zhì)中央處有圓形人 GFs 生長旺盛，狀態(tài)良好，上皮樣細胞消

胞漿突 2-4 個，胞漿均勻，細胞核呈圓形生長特點是貼壁生長，隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，呈扁平的多角形細胞，在胞質(zhì)中央處有圓形人 GFs 生長旺盛，狀態(tài)良好，上皮樣細胞消人 GFs，接種 8 天后可見組織塊周圍有細胞游出 (倒

圖 1 原代培養(yǎng)的人 GFs，接種 8 天后可見組織塊周圍有細胞游出 (倒置顯微鏡，×200)圖 2 第四代人 GFs，細胞生長形態(tài)良好，呈長梭形或多邊形 (H.E 染色，×200)2. 2 來源鑒定（見圖 3、4）免疫細胞化學(xué)檢測結(jié)果顯示，波形絲蛋白染色陽性，細胞胞漿著棕黃色；角蛋白染色陰性，細胞胞漿無著色。證明所培養(yǎng)的細胞為來自外胚間葉、非上皮源性細胞。
【引證文獻】

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1 姚麗艷;黃美香;鐘泉;鄭瑜謙;李大蘭;駱凱;閆福華;;環(huán)孢素A聯(lián)合脂多糖局部用藥對大鼠牙周軟、硬組織形態(tài)的影響[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2012年05期

2 黃美香;閆福華;姚麗艷;李大蘭;鄭瑜謙;李艷芬;林敏魁;;環(huán)孢素A聯(lián)合脂多糖對牙周膜成纖維細胞增殖的影響[J];中華口腔醫(yī)學(xué)研究雜志(電子版);2011年05期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 黃美香;環(huán)孢素A聯(lián)合脂多糖對牙周組織再生的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號：2842596