目的：探討NBD多肽對破骨前體細胞分化為破骨細胞及其骨吸收功能的影響,從而為骨質(zhì)溶解吸收性疾病的治療提供新的研究藥物。 材料和方法：選取小鼠來源的細胞株RAW264.7作為破骨細胞前體細胞,使用RANKL誘導(dǎo)前體細胞分化為破骨樣細胞,研究NBD多肽在此過程及骨吸收過程中所起的作用。實驗分為三個組：溶劑(DMSO)對照組、NBD1(NBD多肽濃度10uM)組和NBD2(NBD多肽濃度20uM)組。檢測方法包括：1.用比色法檢測抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性；2.用TRAP染色法觀察并計數(shù)TRAP+多核細胞(TRAP+MNCs);3.用實時熒光定量PCR (RT-PCR)檢測破骨細胞相關(guān)基因(TRAP基因、組織蛋白酶K基因、降鈣素受體基因)的表達水平；4.用Alamar Blue細胞活性試劑檢測RAW264.7增殖及活性；5.用掃描電子顯微鏡觀察牛股骨磨片表面的破骨細胞骨吸收陷窩。 結(jié)果：NBD1和NBD2組與溶劑(DMSO)對照組相比,TRAP活性下降均有統(tǒng)計學(xué)意義,TRAP活性相對值分別為0.77±0.069(NBDl),0.68±0.104(NBD2); DMSO對照組、NBD1和NBD2組中TRAP+MNCs數(shù)目分別是235.67±12.66,192±10.58,169±8.54,兩個實驗組較對照組變化具有顯著性差異。破骨相關(guān)基因檢測結(jié)果顯示,兩個實驗組trap基因表達較對照組均有降低且具有統(tǒng)計學(xué)意義,分別為對照組表達水平的0.844±0.057(NBD1)和0.789±0.022(NBD2)。實驗組的cathepsin K基因表達水平較對照組分別為0.907±0.039(NBD1)和0.854±0.041(NBD2),相對表達量均有降低且具有統(tǒng)計學(xué)意義。calcitonin receptor基因表達水平較對照組上升,分別為1.322±0.187(NBD1),1.498±0.128(NBD2), NBD1組沒有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05),NBD2組和對照組相比,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。增殖檢測結(jié)果為實驗組和對照組之間RAW264.7的增殖及活性沒有顯著性變化。掃面電鏡觀察骨磨片表面,NBD組中的骨片表面骨吸收陷窩較對照組明顯減少。 結(jié)論：結(jié)果表明NBD多肽能夠抑制破骨細胞形成及其骨吸收活動。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R780.2
【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
英文縮略詞表
目錄
前言
1 材料與方法
2 實驗結(jié)果
3 討論
參考文獻
綜述
    參考文獻
附件
    臨床病例報告
        病例一
        病例二
        病例三
        病例四
        病例五
    病例討論
        病例討論參考文獻
個人簡歷

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本文編號：2842545