背景自骨整合(osseointegration)理論成為口腔種植學發(fā)展的主導理論,口腔種植學得到廣泛的發(fā)展和應用。但是,目前種植修復也存在植入后愈合時間較長,在骨質(zhì)、骨量不良的部位失敗率較高等問題。 種植體-組織界面的反應被認為是決定牙種植體成功和失敗的重要因素之一,所以學者們紛紛通過對種植材料表面進行有效的控制,促進骨整合。近年來在種植體表面粗糙化和表面氧化物活化的基礎(chǔ)上,將生物活性分子復合在種植體表面的生化改性成為種植體設(shè)計研究中較為活躍和發(fā)展較快的領(lǐng)域。為了模擬胞外基質(zhì)對生物行為的調(diào)控功能,通常采用基質(zhì)中的活性成分對鈦表面進行改性,并取得較為肯定的結(jié)果。但這些單一的活性成分與天然基質(zhì)仍有差距。因此為了使鈦種植體的仿生構(gòu)建更接近天然情況,本次研究試想用生物自行分泌的胞外基質(zhì)作為一種新型生物材料,進行初步探討。 目的在體外研究成骨細胞自身分泌的胞外基質(zhì)(ECM)修飾的鈦表面對骨髓基質(zhì)干細胞生物學行為的影響,并為進一步指導鈦種植體表面的仿生構(gòu)建提供依據(jù)。 方法取SD乳鼠,采用改良組織塊法培養(yǎng)成骨細胞。取直徑12 mm的鈦棒,加工成厚1 mm純鈦片,消毒后放入24孔培養(yǎng)板中,用DMEM培養(yǎng)液將成骨細胞濃度調(diào)整為3×105/mL,取1 mL/孔接種于鈦片上,經(jīng)過反復凍融脫去細胞留下基質(zhì),即為基質(zhì)化鈦片(Ti/ECM)。取SD大鼠,采用全血貼壁法培養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細胞(BMSCs),取傳至第3代的細胞,用DMEM培養(yǎng)液將其濃度調(diào)整為1×105/mL,取1 mL/孔分別接種于基質(zhì)化鈦片和純鈦片上,分為基質(zhì)化鈦片組(Ti/ECM/BMSCs)、純鈦片組(CpTi/BMSCs)。通過熒光免疫組化、掃描電鏡的觀察和MTT檢測、ALP活性檢測,觀察基質(zhì)化鈦片的表面形貌變化、胞外基質(zhì)形態(tài)和標識成分,并比較兩組鈦片上骨髓基質(zhì)細胞的早期黏附、鋪展、生長增殖、分化情況。 結(jié)果關(guān)于鈦片的基質(zhì)化構(gòu)建,熒光顯微鏡顯示去細胞后,鈦表面存有胞外基質(zhì)的生物活性成分,其呈現(xiàn)為不規(guī)則絮狀,SEM顯示基質(zhì)化后鈦片表面被一層似膠狀物質(zhì)覆蓋;關(guān)于兩組細胞行為比較,SEM顯示骨髓基質(zhì)細胞在基質(zhì)化鈦片表面黏附、鋪展良好,在接種4h時,Ti/ECM/BMSCs細胞黏附率與CpTi/BMSCs組有統(tǒng)計學差異(P0.05),接種1、3、5、7天后,Ti/ECM組的細胞增殖與CpTi組之間存在顯著性差異(P0.05);接種5天后,Ti/ECM表面的細胞分化與CpTi的之間存在顯著性差異(P0.05)。 結(jié)論經(jīng)過初步基質(zhì)化構(gòu)建,鈦片表面存有多種胞外基質(zhì)的生物活性成分,基質(zhì)化鈦片更有利于骨髓基質(zhì)細胞的早期黏附和進一步鋪展、增殖,并可能具有誘導細胞向成骨細胞分化的作用。
【學位單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2010
【中圖分類】：R783.1
【部分圖文】：

圖1 成骨細胞自顱骨碎片移出,呈短梭形或三角形Fig 1 Osteoblasts move from neonate rats’ calvarium chips成骨細胞的傳代：按上述方法培養(yǎng)至第 7～8 天,細胞融合成單層，覆蓋瓶底面積 80%以上時，可以傳代。倒掉瓶中舊培養(yǎng)液，向瓶中加入 0.25%胰蛋白酶 1～2ml(覆蓋瓶底即可)。輕搖培養(yǎng)瓶，使消化液流遍所有細胞表面，37℃培養(yǎng)箱中消化 2～3min 后取出鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)大部分細胞回縮、細胞間隙增大后直接加入含血清的培養(yǎng)液 4～5ml，終止消化。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁，吹打過程要有一定順序，從培養(yǎng)瓶底一邊到另一邊以確保所有底部都被吹打到；吹打動作要輕柔

圖2 成骨細胞茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色Fig 2 The staining result of osteoblasts by Alizarin method1.2.2.2 全血貼壁法[17-19]培養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細胞取 SD 大鼠兩只脫頸處死，75%酒精浸泡 20min，無菌條件下取股骨和脛骨,剔去附著軟組織，移入無菌平皿以 PBS 沖洗 2 遍后，移入另一無菌平皿，剪開骨頭中端,露出骨髓腔。用含 15%胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)液沖洗骨髓腔，反復 3 次。收集所得細胞懸濁液，接種細胞于 50ml 塑料培養(yǎng)瓶，置 37℃的 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。初接種時培養(yǎng)瓶內(nèi)細胞種類較多

3 初接種時培養(yǎng)瓶內(nèi)細胞種類較多，可見大量血細胞散在懸浮于培養(yǎng)液t the beginning of isolation, various cells can be seen, with lots of blood ce culture medium
【參考文獻】

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本文編號：2840477