目的： 采用酶消化結(jié)合組織塊培養(yǎng)法對(duì)山羊顳下頜(temporomandibular joint, TMJ)關(guān)節(jié)盤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)和擴(kuò)增,探索TMJ關(guān)節(jié)盤細(xì)胞體外培養(yǎng)及擴(kuò)增的新方法。對(duì)山羊關(guān)節(jié)盤細(xì)胞進(jìn)行體外瓊脂糖凝膠三維培養(yǎng),探討動(dòng)態(tài)壓力和靜態(tài)壓力對(duì)凝膠組織細(xì)胞外基質(zhì)分泌的影響。 方法： 1.在無菌條件下,切取一月齡山羊TMJ關(guān)節(jié)盤,剪至1.0 mm3的碎塊,用0.25%胰酶、0.1%Ⅰ型膠原酶消化關(guān)節(jié)盤組織塊,將消化好的組織塊置入6孔板中培養(yǎng)。在倒置相差顯微鏡下連續(xù)觀察細(xì)形態(tài)變化及貼壁率,甲苯胺藍(lán)染色、Ⅰ型膠原免疫組化染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定,測(cè)定其生長(zhǎng)曲線。 2.將關(guān)節(jié)盤細(xì)胞培養(yǎng)至第2代時(shí),轉(zhuǎn)入瓊脂糖凝膠中進(jìn)行三維培養(yǎng)。仿照Shram系統(tǒng)構(gòu)建體外立體培養(yǎng)的細(xì)胞動(dòng)態(tài)壓力加載模型。培養(yǎng)三天后將組織塊隨機(jī)分為三組：一組為動(dòng)態(tài)加力組,即參照Shram等壓力加載條件給予關(guān)節(jié)盤細(xì)胞凝膠組織0.2Mpa,頻率0.1Hz的周期性壓力；另一組為靜態(tài)加力組,即關(guān)節(jié)盤細(xì)胞凝膠組織在0.2MPa靜態(tài)壓力作用下培養(yǎng)；對(duì)照組凝膠組織在常規(guī)條件下靜態(tài)培養(yǎng)。加力完成后對(duì)瓊脂糖凝膠內(nèi)的關(guān)節(jié)盤細(xì)胞進(jìn)行組織學(xué)染色和免疫組化染色,Ⅰ型膠原免疫組化染色結(jié)果使用圖像分析系統(tǒng)做半定量分析。 結(jié)果： 1.原代培養(yǎng)的關(guān)節(jié)盤纖維軟骨細(xì)胞4天可觀察到貼壁細(xì)胞,7天貼壁細(xì)胞逐漸增多,第10天時(shí)細(xì)胞彼此相連,鋪滿平底,細(xì)胞以梭形為主,部分為多角形。傳代后12小時(shí)貼壁率達(dá)90%,大部分為多角形,4-5天即可長(zhǎng)滿瓶底。甲苯胺藍(lán)染色可見異染顆粒,Ⅰ型膠原免疫組化染色胞漿內(nèi)可見棕黃色顆粒。 2.在瓊脂糖凝膠中培養(yǎng)的關(guān)節(jié)盤細(xì)胞能夠維持其表型,能夠正常合成細(xì)胞外基質(zhì)。受0.2MPa,頻率0.1Hz的周期性壓力和0.2 MPa的靜態(tài)壓力刺激后,GAG和Ⅰ型膠原的表達(dá)均增加,且兩者無顯著性差異。 結(jié)論： 1.酶消化結(jié)合組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)的山羊TMJ關(guān)節(jié)盤細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖能力,可作為TMJ關(guān)節(jié)盤組織工程中獲取大量原代細(xì)胞的實(shí)用方法。 2.周期性動(dòng)態(tài)壓力和間斷靜態(tài)壓力都對(duì)關(guān)節(jié)盤細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)合成具有促進(jìn)作用,力學(xué)刺激同細(xì)胞外基質(zhì)的分泌密切相關(guān)。在本實(shí)驗(yàn)條件下,兩種壓力模式產(chǎn)生的結(jié)果無顯著性差異。
【學(xué)位單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R782.6
【部分圖文】：

TMJ關(guān)節(jié)盤纖維軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)(A)培養(yǎng)至4天TNU關(guān)節(jié)盤纖維軟骨塊中遷移出的纖

圖4壓力加載系統(tǒng)A:充氣系統(tǒng)(空氣壓縮機(jī))B:空氣過濾裝置C氣流調(diào)控裝置D:加壓裝置(DI一驅(qū)動(dòng)頭，DZ一加壓板)Figure4Thedynam，eeomPressionunitA:lrlnatableSystemsB:AirfilterdeviLeontroldevleeD:ComPressiondeviee(Dl一Drivehead，D2一PressurePlate)

甲苯胺藍(lán)染色胞漿呈紫藍(lán)色(X200)(B)I型膠原免疫組化染色染成黃色(X20o)toluidinebluestaminge勸ibitedp帥le一blueeyt叩lasm(Xiealstainingof帥e1eollagene勸ibltedyelloweytoPlasm(X200)空空氣過
【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 李振強(qiáng);自組裝顳下頜關(guān)節(jié)盤纖維軟骨模型的構(gòu)建及靜水壓對(duì)其基質(zhì)合成的影響[D];蘭州大學(xué);2011年

2 彭二梅;海藻酸鹽凝膠囊化山羊關(guān)節(jié)盤細(xì)胞短期壓力下蛋白多糖和Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)[D];蘭州大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2837285