目的： 體外觀察白念珠菌和熱帶念珠菌生物膜生長動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)；體外測定柴胡皂苷D對白念珠菌和熱帶念珠菌的最低抑菌濃度及其對兩種念珠菌生物膜形成不同階段的MIC50，探討柴胡皂苷D在微克濃度水平對兩種念珠菌生物膜形成后的抑菌效果，為臨床篩選抗真菌藥物提供一定的理論依據(jù)。 方法： 第一部分：分別將標(biāo)準(zhǔn)株白念珠菌ATCC32354和熱帶念珠菌CBS94活化后稀釋成濃度為1×106/ml的菌懸液并以100μl/孔接種到96孔微量培養(yǎng)板中，用MTT分析法分別測定在接種后3h、6h、12h、24h、48h、72h、96h的念珠菌生物活性并分別繪制白念珠菌和熱帶念珠菌生長曲線。 第二部分：分別將已活化的白念珠菌和熱帶念珠菌稀釋后，振蕩器上振蕩15s后用血球細(xì)胞計(jì)數(shù)板調(diào)節(jié)其濃度至1×10~5～5×10~5/ml，用真菌RPMI1640培養(yǎng)基按1：100稀釋成菌濃度為1×10~3～5×10~3/ml，采用微量稀釋法測定柴胡皂苷D對白念珠菌和熱帶念珠菌的最低抑菌濃度（MIC80）。使用96孔微量培養(yǎng)板設(shè)定8個(gè)濃度，同時(shí)以只加對應(yīng)菌懸液及真菌RPMI1640培養(yǎng)液各100μl作為陽性對照，只加真菌RPMI1640培養(yǎng)液200μl/孔作為空白孔調(diào)零。 第三部分：分別將標(biāo)準(zhǔn)株白念珠菌和熱帶念珠菌活化后稀釋成濃度為1×106/ml的菌懸液，以100μl/孔接種到96孔微量培養(yǎng)板中，將培養(yǎng)板置于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)2h后棄去原培養(yǎng)液，并用PBS輕柔洗去游離的菌細(xì)胞，每孔加入100μl新鮮真菌RPMI1640培養(yǎng)液，繼續(xù)置于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每隔24h更換一次新鮮真菌RPMI1640培養(yǎng)液。分別在接種后3h、6h、12h、24h、72h取出對應(yīng)培養(yǎng)板棄去最后培養(yǎng)液，加入濃度為1280μg/ml～10μg/ml的柴胡皂苷D繼續(xù)置于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h后，采用MTT法分別測定兩種念珠菌在以上各時(shí)間點(diǎn)的念珠菌活性并繪制曲線，選取柴胡皂苷D對白念珠菌和熱帶念珠菌的50%抑菌濃度（MIC50）進(jìn)行分析比較。使用96孔微量培養(yǎng)板設(shè)定8個(gè)濃度，同時(shí)以只加對應(yīng)菌懸液100μl/孔作為陽性對照，只加真菌RPMI1640培養(yǎng)液100μl/孔作為空白孔調(diào)零。 結(jié)果： 第一部分：白念組和熱帶組在3h、6h、12h、24h、48h、72h、96h各時(shí)間點(diǎn)上兩者生物膜形成能力具有顯著性差異，P0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。白念珠菌和熱帶念珠菌生物膜活性增強(qiáng)與培養(yǎng)時(shí)間呈依賴性。白念珠菌在培養(yǎng)前24h生物膜活性增加最為明顯，在培養(yǎng)48h之后生物膜活性維持在相對較高水平的平臺(tái)期不再有明顯的增長；熱帶念珠菌在培養(yǎng)前6h生物膜活性增加明顯，在培養(yǎng)6h之后生物膜活性維持在相對較低水平的平臺(tái)期不再有明顯的增長。體外培養(yǎng)白念珠菌生物膜形成能力較熱帶念珠菌強(qiáng)。 第二部分：用MTT顯示色后酶標(biāo)儀測得柴胡皂苷D對白念珠菌和熱帶念珠菌MIC80分別為80μg/ml和320μg/ml與肉眼觀察判斷結(jié)果相符。 第三部分：柴胡皂苷D對白念珠菌和熱帶念珠菌生物膜形成的抑制作用隨成膜時(shí)間的延長而減弱，通過柴胡皂苷D對兩種念珠菌50%抑菌濃度比較發(fā)現(xiàn)，柴胡皂苷D在3h、6h、12h、24h、72h各時(shí)間點(diǎn)上對白念珠菌生物膜的抑制作用明顯強(qiáng)于其對熱帶念珠菌生物膜的抑制作用，P0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。柴胡皂苷D對熱帶念珠菌生物膜的50%抑菌濃度在72h時(shí)已經(jīng)超過了微克濃度水平。 結(jié)論： 1．白念珠菌與熱帶念珠菌均能在96孔板中形成生物膜，生物膜形成后均能維持在相對較高水平，白念珠菌形成生物膜能力較熱帶念珠菌強(qiáng)。 2．柴胡皂苷D對白念珠菌和熱帶念珠菌生長均有明顯的抑制作用，其對白念珠菌的抑制作用較熱帶念珠菌強(qiáng)。柴胡皂苷D對兩種念珠菌的最低抑菌濃度分別為80μg/ml和320μg/ml，柴胡皂苷D在念珠菌治療方面具有進(jìn)一步研究開發(fā)的價(jià)值。 3．柴胡皂苷D對白念珠菌和熱帶念珠菌生物膜形成均有不同程度抑制作用，柴胡皂苷D抑制白念珠菌生物膜形成能力強(qiáng)于其抑制熱帶念珠菌生物膜形成能力。
【學(xué)位單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R781.54;R285
【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 白念珠菌和熱帶念珠菌生物膜的培養(yǎng)及生長動(dòng)力學(xué)測定
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
第二部分 柴胡皂苷 D 對白念珠菌和熱帶念珠菌 MIC80的測定
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
第三部分 柴胡皂苷D對白念珠菌和熱帶念珠菌生物膜形成抑制作用研究
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 周秋麗,張志強(qiáng),長澤哲郎,日合獎(jiǎng);柴胡皂甙抑制Na~+、K~+-ATP酶活性的構(gòu)效關(guān)系[J];白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1997年04期

2 朱萍;;兩性霉素B脂質(zhì)體:經(jīng)驗(yàn)治療發(fā)熱性嗜中性粒細(xì)胞減少癥及治療侵入性真菌感染[J];國外醫(yī)藥(抗生素分冊);2009年06期

3 果崇慧;吳立梅;齊國榮;;氮唑類抗真菌藥物研究進(jìn)展[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2011年06期

4 沈亮亮;葉元康;潘勝利;武濟(jì)民;;五環(huán)三萜類柴胡皂苷單體抗耐MRSA活性研究[J];同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年03期

5 高清云;沈亮亮;施偉民;葉元康;潘勝利;武濟(jì)民;;Bp3抗耐氟康唑白念珠菌活性研究[J];同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年01期

6 王丹敏;靳穎;董小青;劉麗英;;白色念珠菌生物膜生長動(dòng)力學(xué)分析和形態(tài)學(xué)觀察[J];武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2010年09期

7 汪長中;程惠娟;王龍海;馮鑫;;白念珠菌群體感應(yīng)分子farnesol研究進(jìn)展[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2010年08期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 竇娟;熱帶念珠菌氟康唑耐藥機(jī)制及粉防己堿對其逆轉(zhuǎn)作用的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

2 賈亞利;柴胡皂苷-d體外抗支原體作用及人型支原體生長規(guī)律的研究[D];同濟(jì)大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2837551