牙周疾病作為人類口腔發(fā)生率較高的疾病之一,與齲病統(tǒng)稱為人類兩大口腔疾病。侵襲性牙周炎(aggressive periodontitis,AgP)是一類發(fā)病年齡早、病程進展快、破壞程度大、有家族聚集性的牙周疾病。AgP的發(fā)病因素多樣,發(fā)病機制復雜。越來越多的證據(jù)表明,人類牙周疾病牙周支持組織的破壞過程中,結締組織的降解和牙槽骨的破壞主要是通過誘導活化宿主細胞酶來實現(xiàn)的�；|金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)和基質金屬蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloroteinases-1, TIMP-1)在牙周疾病中的作用近年來引起眾多學者的關注。該組蛋白水解酶主要通過對細胞外基質中大分子降解作用的調(diào)節(jié),參與人體眾多正常的生理過程和病理過程。MMPs與TIMP-1在正常的牙周組織中保持平衡,參與牙周組織的改建。而當在某些刺激因子或炎癥的作用下,會引起MMPs發(fā)生過度分泌或其活性被激活,導致MMPs與TIMP-1的比例超出正常所在范圍。研究表明MMPs及TIMPs的失衡可能是激活細胞外基質、基底膜細胞過度降解的重要原因,從而導致牙周軟組織和牙槽骨組織膠原的破壞與喪失,進一步導致牙周疾病的發(fā)生 間質膠原酶(collagenases)是MMPs的第一大類,主要成員包括MMP-1、 MMP-8和MMP-13。其中MMP-1又被稱為成纖維細胞型膠原酶(fibroblast collagenase, FIB-CL),主要來源于成纖維細胞、吞噬細胞和上皮細胞等,優(yōu)先降解Ⅲ型膠原。有研究認為MMP-1是局限型侵襲性牙周炎中參與牙周組織破壞的膠原酶,尤其是對膠原降解的始動作用。MMP-8又被稱為中性粒細胞型膠原酶(neutrophil collagenase, PMN-CL),是目前有關炎性牙周組織和齦溝液中MMPs表達研究中最多的一種,主要由多形核中性粒細胞產(chǎn)生和分泌,MMP-8主要參與Ⅰ型膠原纖維的破壞,而Ⅰ型纖維膠原又是牙周膜和牙槽骨組織的主要膠原組成成份。MMP-13是上皮組織中首要表達的膠原酶,且在多種牙周組織和細胞中表達,與組織中膠原纖維的快速轉變密切相關,MMP-13對Ⅱ型膠原酶的活性較其他膠原酶更具影響力。TIMP-1是MMPs的內(nèi)源性抑制因子,可以和大多數(shù)MMP結合,被認為是MMPs的重要內(nèi)源性抑制因子之一。 近年來,大量研究表明膠原酶及TIMP-1水平及活性與慢性牙周炎關系密切,但有關膠原酶及TIMP-1水平在亞洲人群AgP患者中的研究尚未見報道。 目的： 本實驗通過檢測MMP-1、MMP-8、MMP-13及TIMP-1在侵襲性牙周炎牙齦組織中的表達,與牙周臨床指標相結合,了解MMPs及TIMP-1與AgP牙周炎癥程度的相關關系,并將MMPs及TIMP-1比值作為新的指標進行分析,進一步分析MMPs及TIMP-1的平衡在AgP發(fā)展中的作用。 方法： 1.病例選擇。實驗組：選擇來自廣東省口腔醫(yī)院牙周科和番禺分院牙周科就診的30例侵襲性牙周炎患者(平均年齡29.37歲)。診斷標準依據(jù)1999年國際研討會牙周病分類法提出的標準。對照組：選擇來自廣東省口腔醫(yī)院外科就診的因阻生齒、錯位牙、埋伏牙而需要拔牙的20例牙周健康者(平均年齡26.35歲),所有患者無全身性疾病,6個月內(nèi)未服用抗生素,未經(jīng)任何牙周治療等,并簽署知情同意書。 2.樣本采集。對納入患者在其治療前采用Florida探針進行全口牙齒的探查和記錄。記錄指標包括菌斑指數(shù)、探診深度、出血指數(shù)、附著喪失,松動度以及根分叉病變,牙周炎患者拍攝全口根尖片。在符合侵襲性牙周炎標準不能保留牙齒拔除過程中獲得牙齦標本,對照組在阻生牙等拔除術中采集牙齦標本。蒸餾水沖洗后,置于4%多聚甲醛中固定12～24h。 3.免疫組織化學檢測。對固定樣本行脫水,透明,石蠟包埋,制成3um的連續(xù)切片,采用多聚賴氨酸防脫片,60℃烤片2h。行MMP-1、MMP-8、MMP-13及TIMP-1常規(guī)免疫組織化學方法檢測。 4.對上述免疫組織化學結果進行定位及半定量分析。陽性細胞為細胞漿染色呈黃褐色的細胞。在x400倍光鏡下,每張切片隨機選擇10個有陽性細胞表達的視野拍攝,IPP (Image Pro Plus)圖片分析測量軟件分析。根據(jù)得到的IOD (Integrated option density)值除以目標分布區(qū)域面積,得到MMP-1、MMP-8、MMP-13及TIMP-1的平均光密度值,并計算MMP-1/TIMP-1、MMP-8/TIMP-1、 MMP-13/TIMP-1比值。 (5)統(tǒng)計學分析。采用SPSS13.0統(tǒng)計進行分析,計量資料結果用描述性分析結果,如x±s表示,各項指標經(jīng)正態(tài)性及方差齊性檢驗后,對兩組臨床指標及TIMP-1、MMP-1、MMP-8、MMP-13表達情況及MMP-1/TIMP-1、 MMP-8/TIMP-1、MMP-13/TIMP-1比值進行單因素方差分析(One-Way ANOVA)或兩獨立樣本非參數(shù)秩和檢驗。采用Spearman法進行相關分析,并繪制ROC曲線。檢驗水準均以a=0.05。 結果： 1. TIMP-1、MMP-1、MMP-8和MMP-13在牙齦組織中的表達和分布。①健康的牙齦組織中。TIMP-1在上皮層和固有層中均可觀察到胞漿呈黃褐色的陽性細胞；主要分布區(qū)域是結締組織區(qū)。MMP-1呈弱表達,在上皮細胞和固有層細胞中可見散在的陽性細胞,且在上皮層內(nèi)的表達呈從棘細胞淺層到棘細胞深層染色強度遞減趨勢。MMP-8和MMP-13在上皮層和固有層中呈弱表達,主要分布區(qū)域為結締組織區(qū)。②AgP組牙齦組織中。TIMP-1呈弱表達,主要表達部位在炎性結締組織區(qū)；與牙齦健康組相比,差異無顯著意義(P0.05)。MMP-1和MMP-8呈強陽性表達,上皮層和固有層中呈現(xiàn)大量密集的胞漿為黃褐色的陽性細胞,主要分布在固有層中炎性細胞密集區(qū),與牙齦健康組相比,差異有顯著性意義(P0.05)。MMP-13呈強陽性表達,上皮層和固有層中大量陽性細胞分布,主要表達部位在炎性細胞浸潤區(qū),與牙齦健康組相比,差異無顯著性意義(P0.05)。 2.臨床指標和實驗指標間的相關關系。AgP組中MMPs及其與TIMP-1相應的比值與臨床指標間存在著一定的相關關系。MMP-1、MMP-8、MMP-1/TIMP-1及MMP-8/TIMP-1與PD和AL均存在顯著的相關關系(P0.05), MMP-1、 MMP-8、MMP-13、MMP-1/TIMP-1及MMP-8/TIMP-1與BOP存在顯著的相關關系(P0.05)。說明MMPs與TIMPs及其比值與AgP的牙周炎癥程度密切相關,隨著炎癥的加重,MMPs與TIMPs的失衡比也加大。各MMPs之間也存在一定的相關性：MMP-1與MMP-8、MMP-1與MMP-13及MMP-8與MMP-13之間存在顯著的相關關系(P0.05),提示MMPs及TIMP-1的平衡可能在AgP發(fā)展中起有重要作用。 (3)把MMPs與TIMP-1的比值作為新因素進行分析。根據(jù)ROC曲線分析,AUC(MMP-8/TIMP-1)=0.947AUC(MMP-8)=0.752, AUC(MMP-1/TIMP-1)=0.870AUC(MMP-1)=0.835, MMPs與TIMP-1的比值的運用,可以大大提高ROC曲線下的面積值AUC,并依據(jù)ROC曲線標準,提示MMP-8/TIMP-1、 MMP-1/TIMP-1、MMP-1和MMP8指標可能是AgP牙周組織破壞和炎癥程度的客觀指標。 結論： 1. MMP-1、MMP-8、MMP-13三種膠原酶及TIMP-1可能參與了牙周組織的正常和病理改建過程。 2.本實驗通過把MMP-1、MMP-8和MMP-13與TIMP-1的比值作為新因素來分析,發(fā)現(xiàn)其意義要遠大于MMP-1、MMP-8和MMP-13單獨作為影響因素來分析時的意義,為AgP病理機制的研究提供了新的角度和思路。
【學位單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2013
【中圖分類】：R781.42
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
材料與方法
    1.研究對象的選擇
    2.全口牙周狀況的檢查和臨床指標的記錄
    3.組織標本的制備
    4.主要試劑
    5.免疫組織化學步驟
    6.結果判定
    7.ImagePro Plus (IPP)計算機圖像分析系統(tǒng)
    8.統(tǒng)計學分析
結果
討論
全文小結
參考文獻
在讀期間研究成果
綜述
    參考文獻
致謝

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本文編號：2837110