背景種植修復(fù)不僅可以減少對天然牙的損傷,最大限度的恢復(fù)患者的咀嚼功能,還可以延緩牙槽骨的吸收,明顯改善患者的生活質(zhì)量,現(xiàn)已成為當(dāng)前修復(fù)缺失牙的常規(guī)治療方案之一。種植體周圍炎作為種植術(shù)后常見的并發(fā)癥之一,其與牙周炎的致病菌相似。牙齦卟啉單胞菌作為種植體周圍炎的主要致病菌,可產(chǎn)生多種毒力因子,同時引起種植體周圍軟、硬組織的炎癥破壞。巨噬細(xì)胞作為固有免疫的重要組成部分,是執(zhí)行固有免疫的效應(yīng)細(xì)胞,并廣泛分布于組織中。Pg所分泌的多種毒力因子如脂多糖及牙齦蛋白酶等與巨噬細(xì)胞的極化密切相關(guān)。極化的巨噬細(xì)胞在組織炎癥破壞及修復(fù)過程中發(fā)揮重要的作用。隨著物質(zhì)生活水平的不斷提高及人口老齡化,我國糖尿病患者的數(shù)量正在急速增加。在口腔局部微環(huán)境下,糖尿病患者種植手術(shù)術(shù)后常出現(xiàn)傷口愈合緩慢、易發(fā)生感染的情況,導(dǎo)致種植體周圍炎,影響種植手術(shù)的成功率。本研究在體外模擬高血糖伴有炎癥微環(huán)境條件,將鈦片與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng),探究血糖對巨噬細(xì)胞極化的影響,以了解巨噬細(xì)胞在此過程中的作用,有助于理解糖尿病患者種植體周圍炎的發(fā)病機(jī)制,為其防治提供新思路。方法:1.細(xì)胞培養(yǎng)選取小鼠單核巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞,用H-DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行復(fù)蘇、培養(yǎng),傳代,備用。2.鈦片預(yù)處理用600目和1000目砂紙逐級打磨鈦片,去離子水清洗,5%硝酸鈍化20min,在丙酮溶液中超聲蕩洗30min,70%乙醇浸泡10min,去離子水浸泡10min,高壓滅菌,備用。3.實驗分組實驗根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)液中葡萄糖濃度的不同分為2組,即5.5m M葡萄糖組+19.5m M甘露醇(正常糖組)和25m M葡萄糖組(高糖組)。4.ELISA法檢測巨噬細(xì)胞極化相關(guān)因子蛋白質(zhì)的表達(dá)取上述備用細(xì)胞接種到6孔板中,每孔加1mg/m L Pg-LPS 20μL及上述2組含不同葡萄糖濃度的細(xì)胞培養(yǎng)液2m L,與鈦片共培養(yǎng)24小時后,采用ELISA法檢測巨噬細(xì)胞極化相關(guān)因子蛋白質(zhì)的表達(dá)情況。5.q RT-PCR法檢測巨噬細(xì)胞極化相關(guān)因子基因的表達(dá)細(xì)胞培養(yǎng)方法同上,采用q RT-PCR法檢測巨噬細(xì)胞極化相關(guān)因子基因的表達(dá)情況。結(jié)果:1.ELISA檢測結(jié)果在不同葡萄糖濃度條件下,Pg-LPS刺激RAW264.7細(xì)胞與鈦片進(jìn)行共培養(yǎng)24小時。與正常糖組比較,高糖組IL-6,i NOS和TNF-α蛋白質(zhì)質(zhì)的表達(dá)升高(P0.05),IL-10和Arg-1蛋白質(zhì)的表達(dá)降低(P0.05)。2.q RT-PCR檢測結(jié)果在不同葡萄糖濃度條件下,Pg-LPS刺激RAW264.7細(xì)胞與鈦片進(jìn)行共培養(yǎng)24小時。與正常糖組比較,高糖組IL-6,IL-10,Arg-1,i NOS和TNF-α基因的表達(dá)均與蛋白質(zhì)的表達(dá)結(jié)果一致,即IL-6,i NOS和TNF-α基因的表達(dá)均升高(P0.05),而IL-10和Arg-1基因的表達(dá)降低(P0.05)。結(jié)論:1.在體外高糖條件下,RAW264.7細(xì)胞在Pg-LPS刺激下與鈦片共培養(yǎng),炎癥因子TNF-α和IL-6表達(dá)升高;2.在體外高糖炎癥微環(huán)境下,高糖能誘導(dǎo)與鈦片共培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞向M1型巨噬細(xì)胞極化。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R783.6
【部分圖文】：

25mM 葡萄糖圖 2.1 RAW264.7 細(xì)胞的形態(tài)(A：×40；B：×100)2.3.2 ELISA檢測RAW264.7細(xì)胞內(nèi)IL-6, IL-10, iNOS, Arg-1和TNF-α蛋白質(zhì)的表達(dá)RAW264.7 細(xì)胞在 10 μg/mL Pg-LPS 刺激下與鈦片共培養(yǎng)，在不同糖濃度的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 24h 后，ELISA 結(jié)果顯示：25mM 葡萄糖組與5.5mM 葡萄糖+19.5mM 甘露醇組相比，IL-6, iNOS 和 TNF-α蛋白質(zhì)表達(dá)升高(P＜0.05)，IL-10 和 Arg-1 蛋白質(zhì)表達(dá)降低(P＜0.05)(圖 2.2)。

圖 2.2 RAW264.7 IL-6, IL-10, iNOS, Arg-1 和 TNF-α蛋白質(zhì)的表達(dá)注:GLU:葡萄糖; MAN:甘露醇2.3.3 qRT-PCR 檢測 RAW264.7 細(xì)胞內(nèi) IL-6, IL-10, iNOS, Arg-1 和 TNF-α的基因表達(dá)RAW264.7 細(xì)胞在 10 μg/mL Pg-LPS 刺激下與鈦片共培養(yǎng)，在不同葡萄糖濃度的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 24h 后，實時定量 PCR(Quantitativereal-time PCR, qRT-PCR)結(jié)果顯示：高糖葡萄糖組與 5.5mM 葡萄糖+19.5mM 甘露醇組相比，IL-6, IL-10, iNOS, Arg-1 和 TNF-α基因表達(dá)與蛋白質(zhì)表達(dá)結(jié)果一致，即 IL-6, iNOS 和 TNF-α基因的表達(dá)均升高(P＜0.05)，而 IL-10 和 Arg-1 基因的表達(dá)下降(P＜0.05)(圖 2.3)。

圖 2.3 RAW264.7 細(xì)胞 IL-6, IL-10, iNOS, Arg-1 和 TNF-α mRNA 的表達(dá)注:GLU:葡萄糖; MAN:甘露醇

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本文編號：2825140