目的:牙髓干細胞在牙髓組織中能保持干細胞未分化狀態(tài),在經(jīng)礦化/成牙本質(zhì)向誘導(dǎo)后牙髓干細胞可以向成牙本質(zhì)細胞方向分化。目前眾多研究表明,在體外培養(yǎng)下不同的誘導(dǎo)因子,可以作為調(diào)控器通過相關(guān)的信號通路在一定程度上參與調(diào)控牙髓干細胞成牙本質(zhì)向分化。本研究用非轉(zhuǎn)移性黑色素瘤糖蛋白B(GPNMB)慢病毒轉(zhuǎn)染人牙髓干細胞(hDPSCs)觀察GPNMB對hDPSCs成牙本質(zhì)向分化的影響。方法:1.用組織塊酶消化聯(lián)合法,從因正畸或阻生齒需要拔除的健康恒牙的牙髓中提取牙髓細胞,細胞經(jīng)過挑單克隆、有限稀釋法擴大培養(yǎng)。通過對細胞進行成脂、礦化/成牙本質(zhì)向誘導(dǎo),經(jīng)油紅0染色檢測細胞形成脂肪滴具有成脂能力,茜素紅染色檢測細胞形成礦化結(jié)節(jié)具有礦化/成牙本質(zhì)向分化的能力;蛋白免疫印記法檢測細胞DSPP、DMP1表達,RT-PCR檢測DSPP、DMP1的mRNA表達確定提取的細胞為牙髓干細胞,建立實驗細胞模型。同時通過蛋白免疫印記法、RT-PCR檢測GPNMB的表達。2.GPNMB慢病毒轉(zhuǎn)染牙髓干細胞,通過蛋白免疫印記法檢測細胞DSPP、DMP1、GPNMB表達。3.將GPNMB慢病毒轉(zhuǎn)染后的牙髓干細胞分為對照組及實驗組,經(jīng)礦化/成牙本質(zhì)向誘導(dǎo),用堿性磷酸酶染色法及RT-PCR比較兩組堿性磷酸酶的活性,DSPP、DMP1、GPNMB的mRNA表達。結(jié)果:1.經(jīng)分離擴大培養(yǎng)的細胞具有牙髓干細胞多向分化的能力,在礦化/成牙本質(zhì)向誘導(dǎo)的過程中檢測到DSPP、DMP1特異性蛋白及mRNA的表達,表達量隨時間的增長而增強。2.在牙髓干細胞礦化/成牙本質(zhì)向誘導(dǎo)的過程中檢測到GPNMB蛋白及mRNA的表達,表達隨誘導(dǎo)時間的延長而增強。3.M0I=50時GPNMB慢病毒轉(zhuǎn)染牙髓干細胞效果較好,轉(zhuǎn)染后牙髓干細胞形態(tài)無明顯改變,蛋白免疫印記法檢測GPNMB表達較對照組增強。4.GPNMB慢病毒轉(zhuǎn)染后,經(jīng)礦化/成牙本質(zhì)向誘導(dǎo),實驗組堿性磷酸酶活性及DSPP、DMP1、GPNMB的mRNA表達比對照組增強。結(jié)論:利用GPNMB慢病毒轉(zhuǎn)染牙髓干細胞經(jīng)礦化/成牙本質(zhì)向誘導(dǎo)后DSPP、DMP1的mRNA表達呈上調(diào)趨勢,說明GPNMB在牙髓干細胞成牙本質(zhì)向分化的過程中起正向調(diào)節(jié)作用。
【學(xué)位單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R78
【部分圖文】：

圖ｉ組織塊周圍細胞爬出，呈放射狀（倒置顯微鏡，Ｘ２０）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋Ｔｉｓｓｕｅ邋ａｒｏｕｎｄ邋ｃｅｌｌｓ邋ｃｒａｗｌ，邋ｒａｄｉａｌｌｙ邋（ｉｎｖｅｒｔｅｄ邋ｍｉｃｒｏｓ

圖３茜素紅染色后礦化結(jié)節(jié)的形成（Ｘ２０）逡逑ｕｒｅ邋３邋Ｔｈｅ邋ｆｏｒｍａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｍｉｎｅｒａｌｉｚｅｄ邋ｎｏｄｕｌｅｓ邋ａｌｉｚａｒｉｎ邋ｒｅｄ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋（＊堿性磷酸酶３生逡逑１５０－１逡逑１００－逡逑ｐ＆邐■ｉｉ邐ｉｉｉｉ逡逑■■丨■邐：：：￥：：：：＞：：：：：：：￥：邐￥：：：：邋＞＞：：：；逡逑ＷｖｒＷｒ＇ｒＷｘ邐；＊＞ｒ＊ｒ＊ｒ＊ｒ＂ｉ＊ｒ＊＞ｒ＊Ａ邐ｉｉｖ逡逑0邋Ｉ邋杜ＳＳｐ丨ｇ；｜邐ｔ：；：；：；：ａ：；ｉ；ｉ；：；Ｓ；ｌ邋Ｉｓｇｇｇｇｊ邐誶`幔懾義狹鑠澹掊危跡櫻掊義鮮奔溴義

本文編號：2814099